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鱼源性成分(Fish)核酸试剂盒说明书

产品简介

鱼源性成分(Fish)核酸试剂盒说明书
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富马酸酮替芬杂质I(10-甲氧基-(1-甲基-哌啶基)-4H-并[4.5]环庚[1.2-b]噻吩-)(标准品)(S)-(-)-叔丁基亚磺

更新时间:2021-03-13
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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 鱼源性成分(Fish)核酸试剂盒说明书

 规格

 48T

 货号

 LZP8163

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
降二氢辣椒2-烟酸酯

2,二(标准品)甲基吡唑

甲氨基安替比林(标准品)牛磺胆酸钠

硫酸肼(标准品)1-苄基-氧羰基-哌啶酮盐酸盐

硫酸肼(标准品)6-溴茚酮

环扁桃酯(标准品)3,5-二氨基-6-吡-2-羧酸甲酯

重肾上腺素(标准品)三基膦醋酸钯

氨基三酸(标准品)溴-2-甲基

1,(标准品)叔戊钠

二甘(标准品)1,3,5-三叔丁基

噻(标准品)环庚甲酸

盐酸阿米洛利杂质(氨基-6--1,基二硫酰)(标准品)三丁基化锡

盐酸地芬尼多杂质(化合物)(标准品)氨基吡啶-2-羧酸

二氧六环(标准品)二(*硅烷基)炔

硝普钠(标准品)5-溴-2-氟甲酸

富马酸酮替芬杂质I(10-甲氧基-(1-甲基-哌啶基)-4H-并[4.5]环庚[1.2-b]噻吩-)(标准品)(S)-(-)-叔丁基亚磺酰

5-硝基糠二酸酯(标准品)2,6-二甲氧基甲酸

后马托品(标准品)2-腺嘌呤核苷

α2纤溶酶色素上皮衍生因子Phospho-ETK (Tyr40) /FITC  荧光素标记兔抗、大、非受体性蛋白酪氨酸激酶ETKIgG100 ul

膜粘连蛋白7E Tag/FITC  荧光素标记抗E TagIgG100 ul

早老素γ分泌酶ets1/E26 /FITC  荧光素标记Ets转录因子家族ets1IgG100 ul

ATP酶蛋白a1Eukaryotic aspartyl proase/FITC  荧光素标记天冬氨酸蛋白酶家族蛋白IgG100 ul

Rho鸟苷酸交换因子2EV71/FITC  荧光素标记肠道病毒71型/手足口病病毒IgG100 ul

酸化Rho鸟苷酸交换因子2EV71(CT)/FITC  荧光素标记肠道病毒71型/手足口病病毒(C端)IgG100 ul

去整合素样金属蛋白酶9EXPB-2/FITC  荧光素标记植物延展素-βIgG100 ul

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腺苷酸环化酶1Phospho-Ezrin (Tyr353) /FITC  荧光素标记兔抗、大、埃兹蛋白IgG100 ul
鱼源性成分(Fish)核酸试剂盒说明书细胞分裂周期2样蛋白激酶5抗体Niazirin中文名:别名:分子式:C14H175

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细胞分裂周期样激酶3抗体Marumoside A中文名:别名:分子式:C14H196

维甲酸调节核基质相关蛋白抗体1-(4-Hydroxy-2,2-dimethylchroman-6-yl)ethane中文名:别名:分子式:C13H16O3

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