ROS线粒体活性氧产生速率测试盒荧光法

常见样本处理方法：

1、血清（浆）样品：直接检测。

2、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1mL提取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声 3s，间隔10s，重复30 次）8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g） ：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，

加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【友情提示】：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失，请仔细阅读购买说明！

商品介绍：

测定意义

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，研究表明，机体95％以上的活性氧（ROS）都来自于线粒体，其失衡所致的氧化应激与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程有关。

正常情况下，细胞内抗氧化防御系统与氧自由基处于平衡状态，细胞内活性氧（ROS）水平维持在较低的生理范围；在病理情况下，细胞内抗氧化系统与氧自由基的平衡被打破，细胞内活性氧水平过多，就可破坏线粒体酶类、脂类和核酸，使机体出现氧化应激，同时，活性氧还可攻击线粒体DNA产生氧化损伤，导致线粒体ATP合成减少、线粒体膜电位破坏等结构和功能变化。

因此，通过检测活性氧的变化来判断线粒体的功能是否正常具有重要意义。

测定原理：

荧光探针-还原型二氯荧光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可扩散通过线粒体膜，在线粒体内被酯酶水解，形成无荧光的DCFH，DCFH迅速与ROS反应生成荧光物—氧化型二氯荧光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根据上述原理设计了利用荧光法直接定量检测线粒体ROS产生速率的方法。将荧光强度随时间变化的数据点拟合，线性回归直线斜率与ROS产生的速率呈正比。

需自备的仪器和用品：

多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。
特点：

1、优化设计的实验方案，1小时即可完成

2、灵敏度高，操作便捷

3、试剂盒提供检测果糖所需的全套试剂

测定步骤：

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样，不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质量和软件的算法。

注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)检测试剂盒香蜂草苷1-烷 99%4-(1-羟乙)吡啶 98%

状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)检测试剂盒香荆芥酚壳聚糖  脱乙酰度≥95%, ,粘度100-200 mpa.s4(5)-羟咪唑盐盐 98%

血管紧张素原(aGT)检测试剂盒香兰素羧化壳聚糖 BR,水溶性(R)-3-羟吡咯烷盐盐 98%

血管紧张素原(aGT)检测试剂盒香蒲新苷壳聚糖 低粘度：<200 mPa.s4-苯酯 98%

血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)检测试剂盒香叶壳聚糖 中粘度200-400 mPa.s2-苯酯 98%

血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)检测试剂盒香叶木素壳聚糖 高粘度>400 mPa.s3--4-氨吡啶 95%

卵泡抑素(FS)检测试剂盒香叶木素-7-O-葡萄糖苷D（+）-氨葡萄糖盐盐 ≥99%吲哚-2-羧 98%

卵泡抑素(FS)检测试剂盒香紫苏D（+）-氨葡萄糖盐盐 分析标准品吲哚-3-羧 98%

状腺素抗体(TAb)检测试剂盒香紫苏二亚砜 分析标准品（剧品）1-环戊 99%

状腺素抗体(TAb)检测试剂盒香紫苏内酯K3 分析标准品1--3-吲哚 97%

儿茶酚(CA)检测试剂盒消旋山莨菪萘醌 98%5-异噁唑-4- 98%

儿茶酚(CA)检测试剂盒小白菊内酯1000℃节能箱式电炉 SX-G071033,3-二烯酯 98%

半胱氨抑制剂/胱抑素C(Cys-C)检测试剂盒小檗三正丁氧化膦 95%3--4- 99%

半胱氨抑制剂/胱抑素C(Cys-C)检测试剂盒小檗红 90%3-(5--1,2,4-噁二唑-3-)苯 97%

乙酰胆受体抗体(AChRab)检测试剂盒小檗红硫酯肌 99%4-(5--1,2,4-噁二唑-3-)苯 97%

乙酰胆受体抗体(AChRab)检测试剂盒小檗硫代硫铵 60%溶液6-吲哚 98%
ROS线粒体活性氧产生速率测试盒荧光法CD93抗体α-氟代-β-氨 Pramipexole 2HCL monohydrate

嗜粒趋化蛋白CCL6抗体α-吡啶（标准品） Vinblastine Sulfate

6号染色体开放阅读框81抗体α-三联噻吩（标准品） Vinblastine Sulfate

巨噬炎性蛋白1β抗体α-戊二(标准品) Vinblastine Sulfate

NK抑制性受体2DL4抗体β-Estradiol（标准品） Temozolomide

NK抑制性受体2DS4抗体β-氨(标准品) Temozolomide

NK抑制性受体3DL1抗体β-环糊精（标准品） Aminoglutethimide

7号染色体开放阅读框46抗体(标准品) Aminoglutethimide

蛋白磷酶PP2A癌抑制蛋白抗体(标准品) Flutamide