DEFA3中性粒细胞防御素3ELISA试剂盒

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

糖皮质激素受体β(GR-β)试剂盒细叶远志皂无水碳钠 AR4-(5-乙-1,2,4-噁二唑-3-)苯 97%

糖皮质激素受体β(GR-β)试剂盒夏佛塔丁二钠 AR，99.0%硫代乙乙酯 98%

糖皮质激素受体α(GR-α)试剂盒仙鹤草酚B亚硝铁化钠 99.98% metals basis3-氟-4-酚 99%

糖皮质激素受体α(GR-α)试剂盒仙鹤草酚D亚磷三苯酯 CP,97%对氟苯乙酯 99%

高敏三状腺原氨(u-T3)试剂盒仙茅亚磷三苯酯 98%3-氟苄 97%

高敏三状腺原氨(u-T3)试剂盒纤精四氢糠 AR,98.0%8-氟-4-羟-2-三氟喹啉 97%

黄体生成素释放激素(LHRH)试剂盒纤细四氢糠 CP对氟苯酯 97%

黄体生成素释放激素(LHRH)试剂盒莶精四氢糠 99%6-羟-2-吡啶羧 97%

8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒腺四 ARN-(2-羟乙)哌 98%

8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒腺嘌呤苯二异酯 98%（剧品）2-羟苯 97%

素(Renin)试剂盒 相思豆素苯二异酯 Standard for GC（剧品）2-羟 99%

素(Renin)试剂盒 相思子苯硫酚 99%（剧品）2- 95%

上腺素(EPI)试剂盒香草四 离子对色谱级，≥99.0% (AT)(R)-(-)-5-羟-2-吡咯烷 99%

上腺素(EPI)试剂盒香草四 ACS, ≥98.0%(S)-(+)-5-羟-2-吡咯烷 98%

雌二受体(ER)试剂盒香草乙乙烷 99%,含铜屑稳定剂(S)-1-Boc-3-羟吡咯烷 98%

雌二受体(ER)试剂盒三 AR,99.5%2-羟-4-三氟嘧啶 97%
DEFA3中性粒细胞防御素3ELISA试剂盒本试剂盒是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。

试剂盒组份：

β-半乳糖酶染色固定液—————100ml

X-Gal溶液————————————5ml

β-半乳糖酶染色液A——————1ml

β-半乳糖酶染色液B——————1ml

β-半乳糖酶染色液C——————100ml

绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞细胞通常体积变大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。

本细胞衰老β-半乳糖酶染色试剂盒，以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖酶催化下会生成深蓝色产物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖酶的细胞或组织。