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PCR扩增试剂盒

PCR扩增试剂盒

产品简介:PCR扩增实验试剂盒纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好

产品型号:50T

浏览次数:1182

更新时间:2023-09-14

产品厂地:上海市

详情介绍
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PCR扩增实验试剂盒组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 PCR扩增试剂盒

 规格

 50T

 货号

 LZP7915

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
链霉亲和素Phospho-c-Cbl (Tyr774) Antibody(2R,4S)-羟基吡咯烷-2-羧酸

西他沙星Phospho-RSK2 (Ser227) (D53A11) Rabbit mAb甲酸甲酯

DHBS;3,5-二-2-羟基磺酸钠TGM2 (D11A6) XP® Rabbit mAb-甲

NBD-PZ;硝基-7-哌并氧杂噁二唑TGM2 (D11A6) XP® Rabbit mAbL-酪氨酸甲酯盐酸盐

BGP;β-甘油酸钠水合物(高纯)LDHA/LDHC (C28H7) Rabbit mAb6-甲基吲哚

Fura 2-AM;钙荧光探针Progesrone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)三水六氟酮

NBD-F;氟-7-硝基-2,1,并氧杂恶二唑CCT2 Antibody溴噻唑

鲁米诺,发光氨Acetyl-α-Tubulin (Lys40) (D20G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氨基-甲基-5-溴吡啶

Leu-pNA;L-亮氨酸-CRMP-2 (D8L6V) Rabbit mAb2-噻吩

BAEE;N-甲酰基-L-精氨酸酯盐酸盐SOAT1 Antibody甲基嘧啶

TAME.HCl;NA-P-甲磺基-L-精氨酸甲酯盐酸盐CD34 (ICO115) Mouse mAb溴五氟

AE;N-酰-L-酪氨酸酯CD44 (156-3C11) Mouse mAb2-氟二酸二甲酯

DAPI;4,’6-二脒基-2-基吲哚CD44 (156-3C11) Mouse mAb2-氨基-5-硝基-2'-氟二甲酮

-α-D-吡喃半糖苷CD109 Antibody2-氨基-6-(三氟甲基)吡啶

ABTS;2,2'-联氨-双(基并噻唑啉-6-磺酸)二盐Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody5--2-氟

β-D-葡糖糖-6-酸钠盐Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody6-甲氧基-2-萘甲

HEPBS;N-(2-羟基)哌-N'-(丁磺酸)PTMScan® Peptide Purification Kit邻氟苄

赫斯特荧光燃料33258CD19 Antibody盐酸洛哌丁

高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒phospho-SHC (Tyr349)  酸化SH2结构域转化蛋白1100 ul

高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISA试剂盒phospho-SHC (Tyr427)  酸化SH2结构域转化蛋白120 ul

高半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒phospho-SHC (Tyr317)  酸化SH2结构域转化蛋白1100 ul

肝脂酶(HL)ELISA试剂盒phospho-SHC (Tyr239/240)  酸化SH2结构域转化蛋白1100 ul

肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)ELISA试剂盒Shiga-like toxin IIe variant subunit A  大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体(O139菌型)100 ul

肝细胞生长因子受体(c-MET/HGFR)ELISA试剂盒Shh/Sonic hedgehog  Shh信号转导通路膜蛋白受体20 ul

肝细胞生长因子激活物(HGFA)ELISA试剂盒OMPC  大肠杆菌外膜孔道蛋白C1 Kit

肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒SHIP1  SH2结构含酸肌醇SHIP1100 ul

肝素结合EGF样生长因子(HBEGF)ELISA试剂盒Phospho-SHIP1 (Tyr1020)  酸化SH2结构含酸肌醇SHIP1100 ul
PCR扩增实验试剂盒磷酸化促凋亡调节蛋白BNIP3抗体Isoerysenegalensein E中文名:别名:分子式:C25H26O6

B淋巴细胞特异性激活OCT结合蛋白1抗体8-Prenylnaringenin中文名:8-异戊烯基柚皮素别名:分子式:C20H20O5

核糖体合成蛋白BOP1抗体Auriculasin中文名:别名:分子式:C25H24O6

调节中心体分离早期相关激酶BORA抗体8-Demethylsideroxylin中文名:别名:分子式:C17H14O5

莱姆病螺旋体抗体Syzalterin中文名:别名:6,8-Dimethylapigenin分子式:C17H14O5

 

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