对PCR扩增试剂盒的一般建议及事项说明

　　一般建议：

　　PCR扩增试剂盒可很稳定的扩增出终长度小于12 kb的片段（如基因组DNA）；当扩增片段终长度在12-20 kb时（如基因组DNA），那么模板质量，变性条件和恰当的dNTP/Mg离子浓度等相关条件对于实验结果非常关键；如果扩增片段总长度大于20kb，则操作条件需要进一步优化。

　　PCR扩增试剂盒相关注意事项说明：

　　1.对于长片段扩增，请使用薄壁PCR管。

　　2.变性时，尽可能缩短变性时间，降低变性温度。

　　3.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。

　　4.纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。

　　5.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。

　　6.PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。

　　7.试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。

　　8.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。

　　9.PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。