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对PCR扩增试剂盒的一般建议及事项说明

发布时间: 2021-05-06  点击次数: 70次
   PCR扩增试剂盒在质量控制上,每批长片段PCR扩增试剂都进行功能测试,常规条件下可以用特异性引物从λDNA上扩增出30 kb的片段。
  一般建议:
  PCR扩增试剂盒可很稳定的扩增出终长度小于12 kb的片段(如基因组DNA);当扩增片段终长度在12-20 kb时(如基因组DNA),那么模板质量,变性条件和恰当的dNTP/Mg离子浓度等相关条件对于实验结果非常关键;如果扩增片段总长度大于20kb,则操作条件需要进一步优化。
  PCR扩增试剂盒相关注意事项说明:
  1.对于长片段扩增,请使用薄壁PCR管。
  2.变性时,尽可能缩短变性时间,降低变性温度。
  3.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
  4.纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
  5.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
  6.PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
  7.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
  8.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
  9.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。

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