DOhh2细胞

产品名称：弥漫大B细胞淋巴瘤细胞
英文简称：DOhh2细胞

货号：LZ-X969753
规格：T25
生长特性：悬浮

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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的*冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型*冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需*培养基重新悬浮细胞。
3.采用、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低  1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

实验材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml灭菌烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个 
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 
6、细胞计数板1块； 
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 
8、酒精灯1台；

实验报告：
一、分离与培养：
   1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
   2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
   3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
   4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
   5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
   1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
   2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
   4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
   5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
   6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微
镜下观察图像并拍照。

注意事项：
     尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
     如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
     染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
     如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
     荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
     用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
     需自备PBS。
     本产品于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
重楼皂苷VIIVitamin B1；维生素B1/盐酸硫/维生素B1盐酸盐冰冻切片神经组织固蓝（FAST BLUE）染色试剂盒

猪去氧胆酸Furazolidone；呋喃唑酮冰冻切片衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

竹红菌素5-Hydroxymethylfurfural；5-羟甲基糠冰冻切片苏木素染色试剂盒

竹红菌甲素Dehydroevodiamine；去氢吴茱萸碱冰冻切片苏木素伊红染色试剂盒

竹红菌乙素Sodium Danshensu；丹参素钠冰冻切片酸性磷酸酶活性染色试剂盒

竹节参皂苷ⅣAVitamin D3；维生素D3冰冻切片酸性磷酸酶活性染色试剂盒

竹节香附素AAurantio-obtusin；橙黄决明素冰冻切片糖原淀粉酶（DIASTASE）法染色试剂盒

梓Gliotoxin；胶霉素冰冻切片糖原高酸希尔（PAS）法染色试剂盒

梓酚 胞苷-5'-单磷酸二钠   5-胞苷-磷酸二钠盐冰冻切片糖原高酸希尔（PAS）法染色试剂盒

紫草呋喃AVitamin B12；维生素B12冰冻切片特恩布尔（TURNBULL）铁（二价）染色试剂盒

紫草苷Vitamin A；维生素A/视冻切片特恩布尔（TURNBULL-DAB）非血红素铁（二价）强化染色试剂盒

紫草素Sulfadiazine；磺嘧啶冰冻切片透明质酸染色试剂盒

紫草酸Ginsenoside Rb3；人参皂苷Rb3冰冻切片网硬蛋白（RETICULIN）染色试剂盒

紫丁香酚苷（五加苷B）Isorhynchophylline；异钩藤碱冰冻切片色素C氧化酶和琥珀酸脱氢酶（Combined COX-SDH）双酶活性染色试剂盒

紫花前胡苷Xylobiose；木二糖冰冻切片色素C氧化酶活性染色试剂盒
DOhh2细胞原钙粘附蛋白β10抗体帕米膦 PACAP-27 (6-27) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)

原钙粘附蛋白β6抗体帕潘立 PACAP-38 (16-38) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)

原钙粘附蛋白β14抗体泮托拉唑钠1.5水合物 PACAP-Related Peptide (1-29)(rat)

钙粘蛋白LKC抗体泮托拉唑钠一水物 Pancreatic Polypeptide,human

PLEKHA7蛋白抗体替佐米中间体I Pancreatic Polypeptide, rat

钙粘蛋白21抗体匹多莫德 Parathyroid Hormone (1-38),human

钙粘蛋白β12抗体匹卡米隆 Pentagastrin

磷化磷脂酰肌激酶调节亚单位gamma抗体匹可硫钠；匹克硫钠 Peptide YY, Human

状旁腺激素相关蛋白抗体扑热息痛/对乙酰氨酚 Peptide YY (canine, mouse,porcine, rat)