TNFα肿瘤坏死因子αELISA试剂盒

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

产品属性：

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

钩端螺旋体IgG(Lep IgG)试剂盒水甘草硒粉 99.9% metals basis,200目氟化钇 powder, 99.99% metals basis

钩端螺旋体IgG(Lep IgG)试剂盒水合氧化前胡素硒粉 ≥99.99% metals basis,200目氟化镱 99.99% metals basis

阿米巴(Amebiasis)试剂盒水黄皮素硒粉 ≥99.999% metals basis，-100mesh，powder硫镱,八水 99.9% REO

阿米巴(Amebiasis)试剂盒水晶兰硒 ≥99.9999% metals basis,Powder硫钇(III),八水 99.9% metals basis

白喉抗体(Diphtheria Ab)试剂盒水苏硒 99.999% metals basis，1-6MM particle size 乙 98%

白喉抗体(Diphtheria Ab)试剂盒水苏糖硒 ≥99.9999% metals basis,Powder,不规则颗粒三聚 99%

囊虫病抗体(CYT Ab)试剂盒水仙* 99.99% metals basis,薄片二二酯 98%

囊虫病抗体(CYT Ab)试剂盒水仙环素二氧化碲 99.99% metals basis二二乙酯 99%

布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)试剂盒水杨二氧化碲 99.999% metals basis二二异酯 99%

布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)试剂盒水杨碲粉   粉末,99.99% metals basis,100目乙二四乙铁钠  13.5-18.5% Fe basis

水痘带状疱疹病IgM(VZV-IgM)试剂盒水杨酯碲  粒状，2-3cm,99.999% metals basis乙乙酯 99%

水痘带状疱疹病IgM(VZV-IgM)试剂盒丝石竹皂元3-O-B-D葡萄糖酯碲 7N乙二四乙四钠 AR,99.0-102.0% (T)

水痘带状疱疹病IgG(VZV-IgG)试剂盒斯皮诺素高纯锡 99.999% metals basis，1-6mm，颗粒亚氨二乙 95%

水痘带状疱疹病IgG(VZV-IgG)试剂盒四姜黄素锡 99.9999%乙酯 99%

军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)试剂盒四氢表小檗碲化锌 99.99% metals basis苯乙 99%

军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)试剂盒四氢非洲防己碲化锌 99.999% metals basis，块状，1-6mm AR，99.0%（剧品）
TNFα肿瘤坏死因子αELISA试剂盒本产品以焦油紫作为核心染料，焦油紫具有感光作用，能够很好地显示尼氏体的变化。尼氏体的存在和消失是神经细胞是否受损的重要指标，当发生脑炎、脑缺血、轴突反应等情况，尼氏体会发生溶解，甚至消失。可以用于石蜡组织切片的尼氏物质、神经元等的染色。

神经元细胞体包括一个具有皱褶核膜的大细胞核、稀疏的染色质和一个明显的核仁。在细胞体中细胞质是尼氏颗粒，即能够代表粗面内质网并在很多神经元中产生特异的斑点状嗜碱性颗粒。尼氏颗粒可以用很多染色来显示如中性红、亚甲基蓝、甲蓝和甲基紫等。染色的变异、pH和分化的时间使一些染色既可以仅突出尼氏物质，也可以显示神经元的细胞核和神经胶质。尼氏体(Nissl body)或称尼氏小体是分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质，能被碱性染料如硫堇、甲蓝和焦油紫等染料染成蓝紫色。各种神经细胞内斗含有尼氏体，但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体会因生理状态的变化而变化，是神经元内合成蛋白质的重要部位，当神经元受到刺激后，包体内的尼氏体会明显减少。

储存条件：常温运输和保存，有效期半年。