MUC5AC粘蛋白/粘液素5ACELISA试剂盒

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

产品属性：

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

靶向核糖核(TR)试剂盒连翘酯HDL-苦杏仁 AR,99.0%氢二钠 AR（剧品）

靶向核糖核(TR)试剂盒连翘酯F氢化 98%三乙酯 99%

蛋白激C(PKC)试剂盒5--苦参C焦亚硫 CP，94.0%氟化，无水 电子级，粉末

蛋白激C(PKC)试剂盒苦参X1,10-菲罗啉(无水) 99%1,1,1,2-四氟乙烷 99.95%

缩(ALD)试剂盒苦参W三聚磷钠 AR,98%三 AR,99.0%

缩(ALD)试剂盒苦参N锡钠 AR,55.3% SnO2烯三氟乙酯 包含 100 ppm MEHQ 稳定剂,98%

L-乳脱氢(L-LDH)试剂盒苦参S亚硫 AR2,2,2-三氟乙 99.5%

L-乳脱氢(L-LDH)试剂盒苦参L单宁 AR大黄素 ≥90% (HPLC)

性神经鞘磷脂(ASM)试剂盒苦参Q3,4,5-三氧苯 99%石杉 分析标准品

性神经鞘磷脂(ASM)试剂盒苦参O硫脲 ACS, ≥99.0%石杉 99%

花生四烯5脂加氧(ALOX-5)试剂盒苦参R硝氧锆 水合物 AR,99.5%和厚朴酚 分析标准品

花生四烯5脂加氧(ALOX-5)试剂盒苦参K二氧化锆 AR,99.0%杨梅素 97%

5脂加氧(5-LO/LOX)试剂盒重楼皂V氢氧化锆 97%杨梅素 分析标准品，≥98%

5脂加氧(5-LO/LOX)试剂盒重楼皂H硝氧锆 99%厚朴酚  ≥98% (HPLC)

腺环化1(AC-1)试剂盒 重楼皂D化锆 98%杨梅 98%

腺环化1(AC-1)试剂盒 伊贝A;辛贝素-3-D-葡萄糖式碳锆(IV) ≥40% ZrO2 basis 分析标准品，≥98%
MUC5AC粘蛋白/粘液素5ACELISA试剂盒橙是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm。阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA 和RNA 结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA 结合量少发绿色荧光，与RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。

在荧光显微镜下观察，橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。橙AO 常与溴化乙啶EB 合用双染，因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

用于细胞核染色时，推荐的橙工作浓度为0.1%。一般孵育条件是室温避光15 分钟。由于不同细胞对橙的摄取能力不同，该法不一定适用所有细胞。

储存：-20℃，避光，有效期12月。