eIF3a真核翻译起始因子3aELISA试剂盒

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

尿激(UK)试剂盒 L-亮氨（白氨）D-蛋氨 99%霉酚吗啉乙酯 分析标准品，≥98%

尿激(UK)试剂盒 L-鸟氨盐盐L-正缬氨 99%新 分析标准品，≥97%

磷烯式羧激(PCK)试剂盒L-苹果L-正亮氨 99%新芒果 分析标准品，≥98%

磷烯式羧激(PCK)试剂盒L-羟脯氨D-鸟氨盐盐 99%芸香柚皮 分析标准品，≥98%

胰蛋白(trypsin)试剂盒 L-乳L-鸟氨盐盐 98%补骨脂素  分析标准品，≥98%

胰蛋白(trypsin)试剂盒 L-色氨L-苯氨叔丁酯盐盐 99%补骨脂素  98%

β位淀粉样前体蛋白裂解1（BACE1）试剂盒L-鼠李糖DL-苯氨 >98.0%(HPLC)枸橘 分析标准品，≥98%

β位淀粉样前体蛋白裂解1（BACE1）试剂盒L-丝氨L-苯氨酯盐盐 98%苦鬼臼素 分析标准品，≥98%

蛋白二硫化物异构前体(PDI)试剂盒L-苏氨D-苯氨 98%原 分析标准品，≥98%

蛋白二硫化物异构前体(PDI)试剂盒L-天冬氨D-脯氨 99%槲皮 分析标准品，≥98%

蛋白二硫化物异构A3(PDIA3)试剂盒L-天冬酰D-丝氨酯盐盐 98%金丝桃 分析标准品，≥98%

蛋白二硫化物异构A3(PDIA3)试剂盒L-缬氨D-丝氨 98.5%槲皮素 分析标准品，≥98.5%

山梨脱氢(SDH)试剂盒L-异亮氨DL-丝氨 98%槲皮素 97%

山梨脱氢(SDH)试剂盒L-组氨L-丝氨酯盐盐 98%吴茱萸次 分析标准品，≥98%

肽脯氨酰顺反异构(PPI)试剂盒L-组氨盐盐D-苏氨 99%吴茱萸次 98%

肽脯氨酰顺反异构(PPI)试剂盒MilataxelD-色氨酯盐盐 98%迷迭香 分析标准品，≥97%
eIF3a真核翻译起始因子3aELISA试剂盒分子量：651.01

外观：淡黄色粉末

溶剂：水或者DMSO

光学特性：Excitation = 355 nm; Emission = 495 nm.

储存：-20℃，避光，有效期两年。

Hoechst 系列染料是一类可用于应用于荧光显微镜和流式细胞术分析的标记DNA 的荧光家族染料。因其可以标记DNA，所以这类染料被广泛的应用于细胞核和线粒体的可视化定位。Hoechst33258 和Hoechst33342 作为类二苯甲亚胺的染料，是其中广泛应用的核染料。这两种染料都可以被350nm 左右的紫外光激发，发射461nm 左右的蓝紫色荧光。Hoechst 染料可以用于固定或者活细胞染色，也通常被用于另一种核染料的替代物，DAPI。他们之间重要的区别在于Hoechst33342 的乙基可以使其更具有亲脂性，因此更易于穿过细胞膜。在一些应用中，Hoechst33258 相比Hoechst33342 表现出较差的膜透性。这类染料也常被用于检测样本DNA 的含量，只需要设置一个荧光强度-DNA 含量之间的标准曲线即可。

本产品是一种长波的核黄染料，通用和退行性示踪标志染料真蓝做神经元的双色标记。在神经元细胞中，核黄优先染色细胞核为黄色荧光，而真蓝作为一种紫外激发光激发的二价阳离子染料可以染色细胞质为蓝色荧光。两种染料在免疫组织化学应用中的表现都非常稳定，可以用于和DAB 染料的联合应用。当Hoechst33258、Hoechst33342 和核黄通过轴突逆行运输到母细胞体后，可能会迁出轴突和母细胞体，因此可以作为毗邻神经胶质细胞细胞核的荧光染料。这种迁出现象在体内和体外的研究中，当您将切片保存于水性环境下，都有发现。使用1%示踪剂时，活体内的迁出现象可以通过限制动物的生存时间而加以控制。体外的迁出现象可以通过材料组织的快速处理来避免。