LPS脂多糖/内毒素ELISA试剂盒

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)试剂盒重楼皂VI四苯溴化膦 98%乙烯利 80%

低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)试剂盒重楼皂VII四乙氢氧化铵 AR,25%水溶液无水四化锡 AR

低密度脂蛋白受体(VLDLR)试剂盒猪去氧胆四化铵 98%三苯化锡 96%

低密度脂蛋白受体(VLDLR)试剂盒竹红菌素四氢氧化铵 1.0 M in H2O乙烯利 80%

低密度脂蛋白受体(LDLR)试剂盒竹红菌素四硫氢铵 99%赤  >90% (HPLC)

低密度脂蛋白受体(LDLR)试剂盒竹红菌乙素四醋铵 90%蒙脱土KSF 蒙脱土KSF ,10 m²/g

高密度脂蛋白(HDL)试剂盒竹节参皂ⅣA四乙氟化铵(二水) 98%N-乙吗啉 99%

高密度脂蛋白(HDL)试剂盒竹节香附素A三盐盐 98%N-乙吗啉 蛋白测序, ≥99.5% (GC)

αS转移(α-GST)试剂盒梓四丁氢氧化铵溶液 ～25% in H2O (～0.8 M)N-酰吗啉 99%

αS转移(α-GST)试剂盒梓酚四丁氢氧化铵溶液 10% in H2ON-吗啉 CP，98%

同型半胱氨(Hcy)试剂盒紫草呋喃A四正丁氟化铵 1M THF溶液N-吗啉 GR，99%

同型半胱氨(Hcy)试剂盒紫草四正丁氟化铵 75% 水溶液二硅油DC-200 粘度~10 mPa.s, neat(25 °C)

游离脂肪(FFA)试剂盒紫草素四正辛 98%  二硅油DC-200 粘度~30000 mPa.s, neat(25 °C)

游离脂肪(FFA)试剂盒紫草苯三三 97%二硅油DC-200 粘度~60000 mPa.s, neat(25 °C)

骨粘连蛋白(ON)试剂盒紫（五加B）三苯膦氢盐 97%1-萘酚 AR，99.0%

骨粘连蛋白(ON)试剂盒紫花前胡苯三化铵 98%萘 99.6%
LPS脂多糖/内毒素ELISA试剂盒瑞氏染液主要应用于血液和骨髓涂片染色。

操作步骤

1. (选做)平置血涂片于染色架上，滴加甲醇固定液，室温固定15-30 分钟。

2. 吸去固定液，室温通风晾干。

3. 将试剂一滴加到载玻片上，均匀覆盖住载片上血细胞，染色时间约为1 分钟。等染液有变红的趋势时，迅速滴加两倍试剂一的量的试剂二。继续染色5 到8 分钟。

4. 小股水流洗片，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。30s 水洗结束后将载片放到阴凉处风干。

5. 显微镜镜检。

染色结果

1. 红细胞呈浅红色，中央稍淡而略有蝶形态。

2. 白细胞系统清晰易分，细胞膜清晰呈紫黑色，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞浆中颗粒呈淡紫红色，嗜粒细胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。单核细胞的胞浆呈灰蓝色，胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。

注意事项

1. 推片：取全血3 微升左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30 度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面向前滑动，至血液铺完血膜为止。

2. 涂片时不要太厚也不要太薄，太厚红细胞重叠并易皱，太薄时不易找到白细胞。

3. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。

4. 试剂一及二染液不能过少，以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400 微升，试剂二是试剂一的1 倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气，使染液充分混合。

5. 镜检时如果红细胞偏蓝，请放在蒸馏水中1-3 分钟，直至红润为止。

6. 染色过淡，可复染。染色过深，可用水冲洗或浸泡，还可用75%乙醇脱色3-5 秒。

储存：2～8℃，避光，有效期12个月。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。