Lp-PLA2脂蛋白磷脂酶A2ELISA试剂盒

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

产品属性：

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α )试剂盒1,3,5-三咖啡酰奎宁4-溴丁 98%苯偶酰 98%

横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α )试剂盒1,3-二咖啡酰奎宁/洋蓟素二聚环戊二烯 97%,Endo苯 Standard for GC，≥99.5%（GC)

骨成型蛋白7(BMP-7)试剂盒1,5-二咖啡酰奎宁二聚环戊二烯 98%,Endo + Exo苯 AR,>98.5%(GC)

骨成型蛋白7(BMP-7)试剂盒1,7-二羟-3,4-二氧山-7-O-葡萄糖二聚环戊二烯 97%,Exo苯 CP,>98%(GC)

25羟维D3(25(OH)D3/25 HVD3)试剂盒1,8-桉叶素橄榄油 CP苯 ACS

25羟维D3(25(OH)D3/25 HVD3)试剂盒1，8-二羟蒽醌橄榄油 药用级，Ph Eur苯 >99.0% (GC)

白三烯B4(LTB4) 试剂盒10-姜酚亚磷三乙酯 98%苯 重蒸馏, ≥99.5%

白三烯B4(LTB4) 试剂盒10-羟癸烯二茂铁 98%DL-苦杏仁 CP,98.5%

肠脂肪结合蛋白(iFABP)试剂盒10-羟攀援山橙二茂铁 99%苯乙 99%

肠脂肪结合蛋白(iFABP)试剂盒10-羟聚（烯酯） SU CP，98.0%（剧品）

大鼠一氧化氮(NO)试剂盒10-羟喜树聚苯乙烯(PS) 通用型II,高强度蓝V AR

大鼠一氧化氮(NO)试剂盒10-去乙酰紫杉;7-表-去乙酰紫杉聚苯乙烯(PS) 通用型III,高强度、押出用、食品用喹啉黄 70%

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)试剂盒 10-脱乙酰巴卡亭聚苯乙烯(PS) 耐冲击型柠檬二氢 AR,98.0%

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)试剂盒 11-O-罗汉果V聚苯乙烯(PS) 高光泽度级香草 AR，99%

骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)试剂盒11-羟柳杉酚聚苯乙烯(PS) 挤出級香草 ≥99%, FCC, FG

骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)试剂盒11-羰-Β-乙酰乳香聚苯乙烯(PS) 食品级天然香兰素 Natural，≥99%, FCC, FG
Lp-PLA2脂蛋白磷脂酶A2ELISA试剂盒BCIP/NBT 碱性磷酯酶显色试剂盒是一种用于免疫组化显色、Western 等膜显色和诱导多功能干细胞iPS 鉴定等的试剂盒。

BCIP/NBT 是碱性磷酯酶的常用底物。在碱性磷酯酶的催化下，BCIP 会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT 发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。

本试剂盒可以用于细胞或组织的碱性磷酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS 的鉴定，也可以用于Western 等结合有碱性磷酯酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的碱性磷酯酶显色。

组份规格：

试剂A：碱性磷酯酶显色缓冲液 100ml

试剂B：BCIP 溶液(300X) 350μl

试剂C：NBT 溶液(150X) 700μl

使用说明

1. 对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5 次，每次3-5 分钟。对于检测内源性碱性磷酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5 次，每次3-5 分钟。

2. 按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：试剂A：碱性磷酯酶显色缓冲液 3mL试剂B：BCIP 溶液(300X) 10μL试剂C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液总体积：3.03mL

3. 后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量BCIP/NBT 染色工作液，确保能充分覆盖样品。

4. 室温避光孵育5-30 分钟或更长时间(可长达24 小时)，直至显色至预期深浅。

5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2 次即可终止显色反应。

6. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

储存：4℃，有效期一年。