iNOS诱导型一氧化氮合成酶ELISA试剂盒

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)试剂盒大豆甾B对壬酚 分析标准品，异构体混合物乙(95%) CP,95.0%

心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)试剂盒大果桉 A对壬酚 分析标准品,纯品乙(95%)  for HPLC

血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨激1(Tie1)试剂盒大果桉 C正 AR,97%乙(95%) GR,95.0%        

血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨激1(Tie1)试剂盒大果桉 E正 CP,95%乙(95%)  ACS

血管生成素2(ANG-2)试剂盒大果桉 H正 Standard for GC，>99%(GC)95%药用酒精 药用级

血管生成素2(ANG-2)试剂盒大果桉 I乙正酯 AR,99.0% 95%乙 光谱纯

血管生成素1(ANG-1)试剂盒大果桉 J醋酯 99%高哌 98%

血管生成素1(ANG-1)试剂盒大果桉 K乙二  99.4%2-吡啶 98%

血管生长素(ANG)试剂盒大果桉 L正 CP,98.5% 乙黄原 AR，95%

血管生长素(ANG)试剂盒大果桉 N聚乙烯吡咯烷 平均分子量 8000, K16-18乙黄原 98%

血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒二三乙烯 CP,98.5%2-氨嘧啶 98%

血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒二酚1,2,3,4-四氢萘 CP2-(3-苯氧) 98%

帕金森氏病2Parkin(Park2)试剂盒螺1,2,3,4-四氢萘 AR，97%1-酰哌啶 99%

帕金森氏病2Parkin(Park2)试剂盒色原烯1,2,3,4-四氢萘 Standard for GC, ≥99.5% (GC)3-吡啶 98%

纽蛋白(VCL)试剂盒烯1,2,3,4-四氢萘  >98.5%(GC)反-玉米素 98%

纽蛋白(VCL)试剂盒酰 F1,2,3,4-四氢萘 分析标准品，≥99.5% (GC)偏钒铵 CP，98%
iNOS诱导型一氧化氮合成酶ELISA试剂盒本试剂盒适用于培养的细胞染色，可应用于荧光显微镜、激光共聚焦计或流式细胞仪检测。7-AAD（7-amino-actinomycin D）是一种核染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD同PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。

储存：2-8℃,避光，有效期12个月。