VEGF-D血管内皮细胞生长因子DELISA试剂盒

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

大鼠可溶性瘦素受体(sLR)试剂盒盐水(1×NS,无菌)Boc-L-谷氨酰 98%2--4-硝吡啶 98.0%

大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)试剂盒盐水(10×NS,无菌)N-叔丁氧羰-D-3-苯氨 98%L-苹果二酯 98%

大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)试剂盒无菌双蒸水Boc-N--L-缬氨 98%2,4-二 97%

大鼠艾杜糖硫酯(IDS)试剂盒 无菌双蒸水BOC-D-氨 98%D-苹果二酯 98%

大鼠艾杜糖硫酯(IDS)试剂盒 碳钠-碳氢钠缓冲液(0.1mol/L,pH9.16-10.83)Nα-叔丁氧羰-N'--L-色氨 97%4-氟吡啶盐盐  98%

大鼠血管内皮生长因子(VEGF)试剂盒 碳氢钠溶液(1mol/L,pH8.3-9.0)Boc-D-酪氨 98%5-羟-1-茚 98%

大鼠血管内皮生长因子(VEGF)试剂盒 亚硝钠水溶液(1%)N,N'-二叔丁氧羰-L-赖氨二环己盐 98%4-羟吲哚 98%

大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒 乙溶液(75%)BOC-D-苯甘氨 98%盐 98%

大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒 乙铵溶液(1mol/L,无菌)BOC-L-异亮氨 99%3--4-硝吡啶-N-氧化物 98%

大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒 乙缓冲液(0.1mol/L,pH3.6-5.6)N-叔丁氧羰-S-三苯-L-半胱氨 99% 2--4-硝氧化吡啶 98%

大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒 乙溶液(3mol/L,pH5.5)叔丁氧羰-L-赖氨  98%间三氟酯 99%

大鼠干因子/肥大生长因子(SCF/MGF)试剂盒乙溶液(5mol/L,pH4.8)N-Boc-4-氧-L-脯氨酯 97%4-哌啶盐盐，水合 98%

大鼠干因子/肥大生长因子(SCF/MGF)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2)N-叔丁氧羰-2-氨  98%4-氨三氟苯 98%

大鼠烟酰腺嘌呤二核磷(NADPH)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2)(S)-N-BOC-4-溴苯氨 98%邻三氟 98%

大鼠烟酰腺嘌呤二核磷(NADPH)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2,无菌)叔丁二硅烷 97%3-(三氟)苯酰 98%

大鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2,无菌)D- 98%4-(三氟)苯 96%
VEGF-D血管内皮细胞生长因子DELISA试剂盒用途：

又称促蓝液，用于染色后蓝化，尤其推荐用于Gill'sⅢ蓝化蓝化。

注意事项：

主要由硫镁、碳氢钠等组成。

储存条件：室温，12个月

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。