超氧阴离子清除能力测试盒(微量法)

公司产品仅供科研使用，下列是产品属性：

商品介绍：

测定意义:

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

测定原理：

AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－与对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

IL2RG Protein Rat 重组大鼠 IL2RG / CD132 蛋白 (His 标签)

ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促肾上腺皮质激素(18-39)(抗原)

BID重组小鼠 BID 蛋白 (His & GST 标签) Protein

IL2 Protein Human 重组人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

CABP5重组人 CABP3 / CABP5 蛋白 (His 标签) Protein

FZD4重组大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 标签) Protein

EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重组表皮生长因子抗原(大鼠)

ITGAX & ITGB2重组人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein

NRG1 Protein Human 重组人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签)

ACVR2A Protein Mouse 重组小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 标签)

EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重组表皮生长因子抗原(大鼠)

NRG1 Protein Human 重组人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签)

FZD4重组大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 标签) Protein

ACVR2A Protein Mouse 重组小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 标签)

ITGAX & ITGB2重组人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein

FCGR1 Protein Mouse 重组小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated

GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1 0.5mgGLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide 胰高血糖素样肽-1(多肽)

REG4重组大鼠 REG4 蛋白 (His 标签) Protein

FCGR3A重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签) Protein

MSLN Protein Human 重组人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (Fc 标签)
超氧阴离子清除能力测试盒(微量法)Guinea IgG/RBITC 罗丹明标记豚鼠IgG 0.3ml

Phospho-5-Lipoxygenase(Ser524) 英文名称： 磷酸化5-脂氧合酶抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh DNPK1 DNA依赖蛋白激酶催化亚基抗体 规格 0.1ml

ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗体IgAMulti-class antibodies规格： 48T

微囊藻毒检测试剂盒 96孔/盒 适用于水样、蓝藻、鱼肉等样品

Anti-CK5/FITC 荧光素标记细胞角蛋白5抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml