肺炎链球菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Polyanetholesulfonic acid sodium salt2-(*硅烷基)乙氧甲基氯 95%萘甲唑啉盐酸盐 99%

Ferron(三氟甲基)*基硅烷 96%吲哚-5-羧酸 98%

Talc(三氟甲基)*基硅烷 0.5 M in THF人造沸石 CP,97%

Cordyceps polysaccharide酸三异酯 98%2-氯乙胺盐酸盐  98%

Ginkgo biloba（三乙基硅烷基）乙炔  97%甲氧基胺盐酸盐 98%

EDOT3-(*基硅基)炔酸 98%2,2,3,3-四氟基烯酸酯  97%,含50ppm BHT稳定剂

2-Amiphel-4-sulfonic acid3-(*基硅基炔基)噻吩 97%环庚三烯酚酮 98%

PTC三乙基硅烷三氟磺酸酯 98%2-氨基-5-氯-2'-氟二苯甲酮 98%

Sodium hydrosulfide hydrateN-[(*基硅)甲基]苄胺 98%2-氨基-5-溴-2'-氟二苯甲酮 98%

Calcium propionate2-(*硅基)乙 98%α-溴邻甲 98%

PMMA三(*硅基)硅烷 90%11-溴十一酸 98%

Triflic acid3-(*基硅烷基)炔基溴 97%11-溴十一 98%

Tributyl Citrate1-(*基硅基)炔 98%4-氯丁 98%

Acetyl tributyl citrate2-(*基硅基)噻唑 96%2,3-二溴酸乙酯 97%

Disodium phenyl phosphate hydrate*基硅烷磺酸盐 97%2-羟基苯乙酮 98%

Acridone氨甲基*基硅烷 98%2-氨基3,5-二溴苯甲酸甲酯 98%

化频哪(>90.0%(HPLC))Cyclin B1 (V152) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)IL-17R/IL-17RA/CD217  白介素17受体抗体

溶剂绿 7(>85.0%(E))BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)IL-17F/IL-24  白介素-17F抗体

磺酰荧光素(>75.0%(HPLC)(T))Microcephalin-1/BRIT1 (D38G5) Rabbit mAbIL-17E/IL-25  白介素-17E抗体

N-琥珀酰亚胺基-7-羟基-3-羧酸酯(>95.0%(HPLC)(T))Microcephalin-1/BRIT1 (D38G5) Rabbit mAbIL-17D/IL-27  白介素-17D抗体

N-琥珀酰亚胺基-7-甲氧基-3-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N))Beclin-1 (2A4) Mouse mAbIL-17C  白介素-17C抗体

5-(2-氨乙基氨基)-1-萘磺酸钠合物(>98.0%(HPLC))TIF1β AntibodyIL-17B  白介素-17B抗体

四溴荧光素盐(>85.0%(HPLC))TIF1β AntibodyIL-17A  白介素-17抗体

溶剂红 48(>98.0%(HPLC)(T))TIF1β (C42G12) Rabbit mAbIL-17  白介素-17抗体

3,4,5,6-四氯荧光素TIF1β (C42G12) Rabbit mAbIL-16/LCF  白介素-16抗体

赤藓红B(>95.0%(E))SLK AntibodyIL-16  白介素16抗体
肺炎链球菌PCR检测试剂盒规格1号染色体开放阅读框194抗体Kielcorin中文名：别名：分子式：C24H20O8

1号染色体开放阅读框198抗体1,5,6-Trihydroxyxanthone中文名：1,5,6-三羟基呫吨酮别名：Mesuaxanthone B分子式：C13H8O5

1号染色体开放阅读框21抗体1,3,5,6-Tetrahydroxyxanthone中文名：1,3,5,6-四羟基呫吨酮别名：分子式：C13H8O6

1号染色体开放阅读框216抗体1,5,6-Trihydroxy-3-methoxyxanthone中文名：1,5,6-三羟基-3-甲氧基呫吨酮别名：分子式：C14H10O6

1号染色体开放阅读框43抗体4-Hydroxy-2,3-dimethoxyxanthone中文名：4-羟基-2,3-二甲氧基呫吨酮别名：分子式：C15H12O5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。