弹状病毒PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Tiron石油 AR,bp 90-120 °C十八胺 ≥97.0% (GC)

Ferrocene酸烯酯 98%辛胺 99%

Lead氯甲酸苄酯 96%十八胺 ≥99.0% (GC)

Lead2-氯异酸乙酯 97%1,3-二胺 98%

Lead环戊 99%聚二烯二甲基氯化铵溶液 Mw <100,000 ,35 wt. % 溶液，100-200

LeadN,N-二苯基氯甲酰胺  98%聚二烯二甲基氯化铵溶液Mw 100,000-200,000 ,20 wt. % 溶液，6

Lead acetate trihydrate氯甲酸异丁酯 98%Mw 200,000-350,000 ,20 wt. % 溶液，250-500 cP (25 °C)

Lead oxide red氯甲酸异酯  97%Mw 400,000-500,000 ,20 wt. %溶液，800-1000 cP (25 °C)

Lead oxide yellow4-甲基环己酮 98%三月桂胺 95%

Lead(II)borate氯甲酸-4-硝基苄酯 97%三辛胺 90%

Lead(II)carbonate吡唑 99%十四胺 96%

Lead chromate1,5-戊二 97%钛酸钡 粉末, <2 μm, 99.5% metals basis

Lead hydroxide氯甲酸苯酯 98%钛酸钡 99.99% metals basis

Lead(II)iodide氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯 97%纳米钛酸钡 99.9% metals basis,<100 nm

Lead(IV)acetate氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯 99%D-木糖 98%

Lead(II)acetate basic2,2,2-三 98%异烟酸 AR,99%

乙(>99.5%(GC))Neogenin (D7M8E) Rabbit mAbJunctophilin 3  连接蛋白JPH3抗体

庚烷(>99.0%(GC))Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Jun D  活化蛋白激酶D抗体

乙酸乙酯(>99.5%(GC))Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb (Biotinylated)Jun B  活化蛋白激酶B抗体

乙酸丁酯(>99.0%(GC))HDAC3 (7G6C5) Mouse mAbJNK3/MAPK10  氨基末端激酶3抗体

乙酸异戊酯(>98.0%(GC))HDAC3 (7G6C5) Mouse mAbJNK2  氨基末端激酶2抗体

乙(>99.5%(GC))SOCS1 (A156) AntibodyJNK1/3  氨基末端激酶1/3抗体

苯(>99.5%(GC))SOCS1 (A156) AntibodyJNK1/2/3  氨基末端激酶1/2/3抗体

1-丁(>99.0%(GC))MST2 AntibodyJMY  连接介导调节蛋白抗体

溴(含稳定剂二苯胺)(>99.0%(GC))MST2 AntibodyJMJD7  组蛋白去甲基转移酶JMJD7抗体

环己烷(>99.5%(GC))HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjugate)JMJD6  凋亡细胞清除受体抗体
弹状病毒PCR检测试剂盒说明书4号染色体开放阅读框21抗体Burchellin中文名：别名：分子式：C20H20O5

紧密连接蛋白2抗体(±)-Piresil中文名：(±)-松脂素别名：松脂酚分子式：C20H22O6

紧密连接蛋白7抗体Isodihydrofutoquil B中文名：别名：Lancifolin E分子式：C21H24O5

补体C3cα片段2抗体Isodihydrofutoquil A中文名：别名：Lancifolin F分子式：C21H24O5

补体C3cα 链片段1抗体5'-Methoxylariciresil中文名：5'-甲氧基落叶松树脂醇别名：分子式：C21H26O7
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。