痒螨通用PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Mangaus carbonate草酸高铁铵 98%4-Boc-氨基哌啶 98%

Manganese tetroxide硫酸亚铁铵，六 AR，99.5%氯铬酸吡啶 98%

Mangaus dihydrogen phosphate硫酸高铁铵,十二 AR，99.0%(R)-1-Boc-3-羟基吡咯烷  98%

Mangaus acetate tetrahydrate乙基纤维素 电子级对四联苯 98%

Potassium sodium tartrate tetrahydrate鞣花酸 96%红荧烯 99%

Sodium bromide没食子酸乙酯 98%(R)-3-氨基-1-BOC-哌啶 98%

Karl Flscher reagent荧光素 IND(R)-(-)-3- 氨基吡咯烷 98%

Karl Flscher reagent柠檬酸铁 ARR-1-苄氧羰基－羟基吡咯 95%

Sodium iodate柠檬酸铁 细胞培养级三氧化硫-吡啶复合物 97%

Azobenzene硫酸铁 AR，Fe 21-23 %(S)-1－叔丁氧羰基－3－氨基哌啶 98%

4-Bromochlorobenzene硫酸亚铁，七 ACS, ≥99.0%(S)-3-羟基吡咯烷盐酸盐 97%

4-Bromobiphenyl石蕊 AR(S)-3-氨基吡咯烷 98%

CoroneneDL-苦杏仁酸 AR,99.0%S-1-苄氧羰基-3-羧基吡咯 97%

1,3-Dibromobenzene氢化 98%三(4-苯)胺 98%

2,2'-Biphel焦亚硫酸 CP，94.0%8-羟基喹啉铝 98%

DMB1,10-菲罗啉(无) 99%2,6-二氟苯酸 98%

氨苯蝶啶（标准品）CamptothecinRAB3A  ras癌基因家族Rab3a抗体

拉呋替丁Phospho-GKAP (Ser346) AntibodyRAB38  G蛋白结合蛋白RAB38抗体

拉呋替丁（标准品）VAMP3 AntibodyRAB35  RAS相关蛋白癌基因Rab35抗体

托可索仑/维生素E聚乙二琥珀酸酯MED26 AntibodyRab27a  RAM-11抗体

盐酸甲氧那明PKCθ (E1I7Y) Rabbit mAbRab25  癌基因RAS相关蛋白Rab25抗体

(S)-1-苯基-1,2,3,4-四氢异喹啉 STING (D2P2F) Rabbit mAbRab24  ras基因相关蛋白Rab24抗体

盐酸罗沙替丁醋酸酯Langerin (D9H7R) XP® Rabbit mAbRAB21  G蛋白家族RAB21蛋白抗体

培美曲塞酸Langerin (D9H7R) XP® Rabbit mAbRAB20  ras癌基因家族RAB20抗体

培美曲塞酸(标准品)SimpleChIP® Human β-Actin Promoter PrimersRAB2/RAB2A  ras癌基因家族Rab2抗体

尼泊金甲酯；对羟基苯甲酸甲酯Stathmin (D1Y5A) Rabbit mAbRab17  RAS癌基因相关蛋白RAB17抗体
痒螨通用PCR检测试剂盒说明书人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人血血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：250毫克

人循环免疫复合物(CIC)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃500ul

人烟酰腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人延伸蛋白A(EloA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：

人氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。