耶氏肺孢子虫PCR检测试剂盒价格上海联祖生物相关产品:PYD检测试剂盒 预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液称重后备用*的内源性及外源性因素对DNA氧化损伤的生物标志物
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产品名称 | 耶氏肺孢子虫PCR检测试剂盒价格 |
英文名称 | Pneumocystis jirovecii PCR |
货号 | LZP7153 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
OPD-HC1哌啶 Standard for GC, ≥99.5% (GC)苯偶酰 98%
IAM2,6-吡啶二羰酰氯 96%苯甲 Standard for GC,≥99.5%(GC)
Putrescine dihydrochloride亚硝基铁 CP苯甲 AR,>98.5%(GC)
Formamide醌氢醌 97%苯甲 CP,>98%(GC)
Formamide Deionized磷钼酸钠,合 AR苯甲 ACS
DMFA次氯酸钠溶液 AR,6-14% active chlorine basis苯甲 >99.0% (GC)
Spermine次氯酸钠 CP,available chlorine 5.5 %苯甲 重蒸馏, ≥99.5%
Spermine tetrahydrochloride次氯酸钠溶液 ACS,available chlorine 5.00 %DL-苦杏仁酸 CP,98.5%
Spermidine硫代乙酸钠 AR,80.0%苯乙 99%
Spermidine trihydrochloride硫代乙酸钠 BR CP,98.0%()
CDC硫代乙酸钠 98%蓝V AR
DCCI亚硝基铁化钠 AR,99.0%喹啉黄 70%
DIPCDI无碳酸钠 AR柠檬酸二氢 AR,98.0%
NEM丁二酸钠 AR,99.0%香草 AR,99%
HONB亚硝基铁化钠 99.98% metals basis香草 ≥99%, FCC, FG
NBS亚磷酸三苯酯 CP,97%天然香兰素 Natural,≥99%, FCC, FG
氟派利多,氟哌利多(标准品)CYLD (D6O5O) Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗猴IgG
6-疏基嘌呤/6-巯基嘌呤(一合物)Acetyl-Histone H2B (Lys5) (D5H1S) XP® Rabbit mAbRabbit anti-Monkey IgG whole serum 兔抗猴IgG抗血清
扑热息痛/对乙酰氨基酚Acetyl-Histone H2B (Lys5) (D5H1S) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-Monkey IgG 兔抗猴IgG
扑热息痛(标准品)STF-1 (D1Z2A) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗猴IgM
(R)-1-氨基-3-甲基丁基酸蒎烷二酯三氟醋酸盐K48-linkage Specific Polyubiquitin (D9D5) Rabbit mAb (HRP Conjugate)Rabbit Anti-MK IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗猴IgM
奥拉帕尼PDBu (Phorbol 12Rabbit Anti-MK IgM/PE PE标记的兔抗猴IgM
花椒毒素/8-甲氧基补骨脂素/甲氧林PTMScan® Cleaved Caspase Substrate Motif [DE(T/S/A)D] KitRabbit Anti-MK IgM/Cy7 Cy7标记的兔抗猴IgM
花椒毒素/(标准品)Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb (PE Conjugate)Rabbit Anti-MK IgM/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗猴IgM
奎尼丁C/EBP Antibody Sampler KitRabbit Anti-MK IgM/Cy5 Cy5标记的兔抗猴IgM
单月桂酸甘油酯/甘油一月桂酸酯Prostate Specific Membrane Antigen (D7I8E) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/APC APC标记的兔抗猴IgM
耶氏肺孢子虫PCR检测试剂盒价格人绒毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:1公斤
人溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
人溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:RT100克
人溶血补体(Hc)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人乳酸脱酶(LDH)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白抗体IgG(LF/LTFAb-Ig)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人状瘤病毒抗体IgG(HPV-IgG)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。