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多杀巴斯德菌PCR检测试剂盒厂家

产品简介

多杀巴斯德菌PCR检测试剂盒厂家
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HK3检测试剂盒公司产品仅用于科研实验,不做其他用途!

更新时间:2021-03-13
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 多杀巴斯德菌PCR检测试剂盒厂家

 英文名称

 Pasteurella multocidaPCR

 货号

 LZP7114

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
Sodium lactate正丁酰氯  98%2,3-二氯-1,4-萘醌 98%

Sodium DL-lactate氯代异烷 CP,97%1-代萘 98%

Calcium citrate tetrahydrate氯代异烷 GR,99%1-硝基萘 CP,94%

Ferric citrate氯乙酰氯 98%1-硝基萘 99%

Sodium DL-ma1ate3-氯新戊酰氯 98%β-萘酚 AR

Sodium DL-ma1ate trihydrate氯代正烷 99%β-萘酚 荧光指示剂, ≥99.0% (GC

Zinc gluconate二氯乙酰氯 98%3,5-二氯-1-溴苯 98%

Calcium D-gluconate酸乙酯 97%酮缩甘油 98%

Ferric phosphate dihydrate酸乙酯 AR,99% 3,5-二氯苯异酸酯 97%

Iron(III) phosphate tetrahydrate异丁酰氯 98%N-甲基邻苯二胺盐酸盐 99%

DL-lactic acid lithium s酸甲酯 AR,99.0%1,2,3,5-四氯苯 96%

Sodium citrate dihydrate*酯 99%1,2,3,5-四氯苯 分析标准品

Sodium D-gluconate三氯乙酰氯 98%1,3,5-三氯苯 99%

CNP-Afu特戊酰氯 98%1,3,5-三氯苯标准溶液 0.109mg/ml,基体: 异辛烷

Potassium sorbate正戊酰氯 98%1,2,4,5-四氯苯 98%

Calcium DL-malate AR,98%1,2,4,5-四氯苯标准溶液 0.104mg/ml,基体:异辛烷

艾地苯醌(标准品)IL-6 (D3K2N) Rabbit mAbRNF150  环指蛋白150抗体

伊潘立酮MAPKAPK-2 (D1E11) Rabbit mAbRNF15  环指蛋白15抗体

伊潘立酮(标准品)EML4 (D7Y8F) XP® Rabbit mAbRNF149  环指蛋白149抗体

亚胺培南Human EGF Neutralizing (D8A1) Rabbit mAbRNF148  环指蛋白148抗体

亚胺培南(标准品)Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)RNF144  E3泛素蛋白连接酶144A抗体

吲达帕胺LLGL1 (D2B5A) Rabbit mAbRNF14  环指蛋白14抗体

吲达帕胺(标准品)Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb (PE Conjugate)RNF14  环指蛋白14抗体

(标准品)IL-10 (D13A11) XP® Rabbit mAbRNF139  环指蛋白139抗体

p190-A RhoGAP (D8Q6C) Rabbit mAbRNF138  环指蛋白138抗体

盐酸洛哌丁胺HSP60 (D6F1) XP® Rabbit mAbRNF133  环指蛋白133抗体
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