岛青霉PCR检测试剂盒价格上海联祖生物相关产品:HMGCS1检测试剂盒用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度
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1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 岛青霉PCR检测试剂盒价格 |
英文名称 | Penicillium islandicumPCR |
货号 | LZP7125 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
BCIP, 2Na辛酸乙酯 ≥99%, FCC, FG噻吩-2-羧酸 99%
BCIP丁酸乙酯 GCS,≥99.5% (GC) 2-噻吩乙酰氯 98%
INT Substrate solution丁酸乙酯 99%3-噻吩甲 98%
Alcian Blue 8GX丁酸乙酯 ≥99%, FCC富勒烯C70 99%
Fluorescamine丁酸乙酯 分析标准品富勒烯C70 98%
Brilliant cresyl bulue酸乙酯 GCS,≥99.5% (GC) 富勒烯C60 99.9%
Brilliant green酸乙酯 CP,98%富勒烯C70 99%
Light green SF yellowish酸乙酯 AR,99%富勒烯C60 99.9%
Naphthol green B酸乙酯 分析标准品,≥99.7% (GC)黄色氧化铅 99.999% metals basis
Fast green FCF酸乙酯 ≥98%, FCC, FG2-氨基-3,4-二甲酸 98%
Bromocresol green乙酯 GCS,≥99.5% (GC)反式-(1R,2R)-2-氨基环戊盐酸盐 97%
Bromocresol green sodium salt乙酯 99%反式-(1S,2S)-2-氨基环戊盐酸盐 98%
Methyl Red mixed indicator solution乙酯 ≥99%, FCC顺式-(1R,2S)-2-氨基环戊盐酸盐 98%
Methyl Red mixed indicator powder己酸乙酯 Standard for GC,>99%(GC)3-氨基巴豆酸甲酯 97%
Methylene green己酸乙酯 CP,98.0%(S)-3-氨基-1,2- 98%
Methyl Green己酸乙酯 99%3-氨基-2-己内酰胺 97%
盐酸班布特罗DNA-PKcs (3H6) Mouse mAbREF-1/APEX1 多功能DNA修复酶抗体
盐酸乙胺丁KIFC1 AntibodyREEP5 受体表达蛋白5/息肉相关蛋白抗体
盐酸乙胺丁(标准品)Phospho-Scribble (Ser1220) (D8A2) Rabbit mAbRED/CSA2 软骨肉瘤相关蛋白2抗体
盐酸苄丝肼c-Myb (D2R4Y) Rabbit mAbRECQL5 RecQ解旋酶样蛋白5抗体
卡格列净;坎格列净PathScan® Phospho-Ret (panTyr) Chemiluminescent Sandwich ELISA KitRECQL5 RecQ解旋酶样蛋白5抗体
苯骈三氮唑(BTA,1,2,3-苯骈三氮唑)Pumilio 1 AntibodyrecPEP 重组猪乙脑病毒结构蛋白抗体
盐酸倍他司汀Pumilio 2 AntibodyRECK 金属蛋白酶抑制因子RECK抗体
盐酸倍他司汀(标准品)SignalSilence® p27 Kip1 siRNA IREC8 减数分裂重组蛋白家族REC8抗体
甲磺酸倍他司汀CDCP1 (D8M5K) Rabbit mAbRDH13 视黄脱氢酶13抗体
胰岛素(猪)SunitinibRDH11 视黄脱氢酶11抗体(型肝炎病毒核心蛋白)
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