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马内菲青霉PCR检测试剂盒厂家

马内菲青霉PCR检测试剂盒厂家

产品简介:马内菲青霉PCR检测试剂盒厂家
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产品型号:50T

浏览次数:37

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 马内菲青霉PCR检测试剂盒厂家

 英文名称

 Penicillium marneffeiPCR

 货号

 LZP7126

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
Januˊs green B己酸乙酯 ≥98%, FCC, FG2-氨基-3-甲酸 98%

Resazurin sodium salt棕榈酸乙酯 98%2-溴-3-硝基吡啶 98%

Azure II棕榈酸乙酯 standard for GC, ≥99% (GC)4-苯基苯甲酸 99%

Azure B棕榈酸乙酯 ≥98%, FGN-二苯甲基氮杂环丁烷-3- 98%

Azure II eosin肉桂酸乙酯 98%4-溴-2-甲氧基苯酚 98%

Orange G6肉桂酸乙酯 99%3-溴苯甲 99%

Orange IV戊酸乙酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)α-溴 97%

Orange Ⅱ戊酸乙酯 98%3-溴-4-甲基吡啶 97%

Orange Ⅰ菠萝酸乙酯 99%N-Boc-4-哌啶甲 97%

Auramine O乳酸乙酯 standard for GC,≥99.0% (GC) 2,8-双(三氟甲基)-4-羟基喹啉 99%

Besmarck brown Y乳酸乙酯 ≥98%, FCC3-溴苯磺酰氯 98%

Acridine orange乳酸乙酯 98%二乙基膦酰基乙酸叔丁酯 95%

Acriflavine异戊酸乙酯 99%2-溴-4-氟苯甲 98%

Acridine hydrochloride异戊酸乙酯 ≥99%, FCC, Kosher, FG4-溴杨酸 97%

Acriflavine hydrochloride异戊酸乙酯 ≥99.7% (GC)4-溴-2-(三氟甲基)苯甲 97%

Methyl orange油酸乙酯 75.0% (GC)3-溴 98%

氧化铋VGLUT1 AntibodyRCS1/FAM64A  染色体分离调节蛋白1抗体

2-氯-1,3-TPH-1 (D10C10) Rabbit mAbRCL/c Myc responsive  c-Myc应答蛋白抗体

富马酸比索洛尔TAP1 AntibodyRCC2  染色体浓缩调节蛋白2抗体

盐酸溴己新ERCC1 (D6G6) XP® Rabbit mAbRCC1  染色体浓缩调控蛋白1抗体

盐酸布比卡因ERCC1 (D6G6) XP® Rabbit mAbRCBTB1/CLLD7  鸟嘌呤核苷酸交换因子抗体

盐酸布比卡因(标准品)Histone H2A (D6O3A) Rabbit mAbRCAN2/DSCR1L1  钙调神经磷酸酶调节蛋白2抗体(唐氏综合征候选区域蛋白1样蛋白1)

盐酸布替萘芬α-Tubulin (DM1A) Mouse mAb (HRP Conjugate)R-cadherin/Cadherin 4  R-钙粘附分子抗体

卡托普利SignalSilence® UCHL1 siRNA IRBR2/Rb2 p130  视网膜母细胞瘤样蛋白2抗体

卡托普利(标准品)ARID1A/BAF250A (D2A8U) Rabbit mAbRBPJK/RBP-J  tch转录调控蛋白RBPJK抗体

卡比多巴β-Amyloid (1-37 Specific) (D2A6H) Rabbit mAb (Biotinylated)RBP4  视黄结合蛋白4抗体
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