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南非诺卡菌PCR检测试剂盒说明书

南非诺卡菌PCR检测试剂盒说明书

产品简介:南非诺卡菌PCR检测试剂盒说明书
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产品型号:50T

浏览次数:31

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 南非诺卡菌PCR检测试剂盒说明书

 英文名称

 Nocardia transvalensisPCR

 货号

 LZP7071

组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
L-(+)-Selemethionine氯化乙酰硫代胆碱 99%人参皂甙 Rc  分析标准品,>98%

AdoMet10-壬基吖啶橙溴化物 荧光级人参皂甙 Rd  分析标准品,>98%

L-Homocystine阿脲,四  98%人参皂甙 Re 分析标准品,>98%

L-Cystathionine甾酮 98%人参皂苷Rh1 分析标准品,≥98%

Cys-GlyL-α-磷脂酰胆碱-β-花生四烯酰-γ-硬脂酰 10 mg/mL 氯,即1ml人参皂苷Rf 分析标准品,≥98%

ε-PL磷酸氢钠铵 AR人参皂苷Rb3 分析标准品,≥98%

 α-Chymotrypsin(bovine)3-氨基噻吩-2-羧酰胺 97%异酸正丁酯 98%

糊精化酶4-氨基-2,6-二氯吡啶 97%乙酸异烯酯 99%

α-Amylase from Aspergillus oryzae8-氨基芘-1,3,6-三磺酸三钠盐 荧光级印刷胶带,用于封装纸箱,60m*60mm*0.057mm

β-Amylase4-氨基苯甲脒 97%2-氨基-5-氯二苯甲酮 98%

Pectinase4-氨基喹哪啶 98%2-氨基-5-硝基二苯酮 98%

Pectolyase Y-232-氨基辛酸 98%4-苯基二苯酮 99%

Bromelaine3-氨基-2-恶唑烷酮 分析标准品二苯甲酮腙 98%

Papain抗坏血酸钙 分析标准品4-氯二苯甲酮 99%

Acidic Protease阿特拉津 分析标准品,99%2-甲基氨-5-氯二苯甲酮  99%

Dispase1-氨基-5-萘酚 97%2-氯-5-硝基二苯甲酮  98%

/孕酮(标准品)Recombinant EGFP protein  重组增强型绿色荧光SPAC7/C13ORF28  顶端体相关蛋白7抗体

匹莫范色林;哌马色林ER-alpha  雌激素受体alphaSPA-1/SIPA-1  信号感应增殖相关蛋白1抗体

乙胺嘧啶GHR (growth hormone receptor)  生长激素受体(抗原)SP-A  肺表面活性蛋白A抗体

乙胺嘧啶(标准品)GLUT1(Glucose transporter type 1)  葡萄糖转运蛋白1(抗原)SP17/CT22  表面蛋白Sp17抗体

富马酸喹硫平hypothetical protein (LOC55652)  hypothetical protein 抗原Sox9a  转录因子sox9a抗体

富马酸喹硫平(标准品)HCCR-1(BRI3 binding protein)  人基因/bri3结合蛋白(抗原)SOX9/SRA1  转录因子SOX9蛋白抗体

雷特格韦pre S1/S2 protein [HBV]  乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原)SOX4  核转录因子SOX4抗体

雷特格韦HCV-HCBP1/ACY-3(Hepatitis C virus core-binding protein 1)  丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白-1(抗原)SOX22  核转录因子SOX22抗体

雷帕霉素/西罗莫司HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P)  人类疱疹病毒8抗原Sox2  胚胎干细胞关键蛋白抗体

雷帕霉素/西罗莫司(标准品)HHV8/ORF K2/vIL-6(Human herpesvirus 8)  人类疱疹病毒8抗原SOX11  转录因子SOX-11蛋白抗体
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检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

 



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