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肉色诺卡菌PCR检测试剂盒厂家

肉色诺卡菌PCR检测试剂盒厂家

产品简介:肉色诺卡菌PCR检测试剂盒厂家
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AZU检测试剂盒微量试剂取用前请离心集液操作步骤可以以此为基础稍作修改即可,故不再赘述

产品型号:50T

浏览次数:35

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 肉色诺卡菌PCR检测试剂盒厂家

 英文名称

 Nocardia carneaPCR

 货号

 LZP7066

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
N-CBZ-L-Proline小鼠关节软骨细胞完全培养基二乙酰一肟 AR

Z-D-Pro-OH小鼠胎儿成纤维细胞完全培养基二乙酰一肟  >98.0%(GC)

Z-L-Isoleucine小鼠胎儿表皮角质形成层细胞完全培养基氢酸 AR,≥47.0%

Z-Leu-OH小鼠成年表皮角质形成层细胞完全培养基五钠 80%()

Z-D-Leu-OH小鼠表皮角质形成细胞完全培养基间溴氟苯 99%

Z-D-Phenylalanil小鼠皮下脂肪细胞完全培养基三氧化二锑 SP

Z-Ser-OH小鼠内脏脂肪细胞完全培养基三氧化二锑 99.99% metals basis

CBZ-L-Tryptophan小鼠表皮黑色素细胞完全培养基锑粒 99.999% metals basis,beads,1-6 mm

CBZ-D-Trp小鼠小梁网细胞完全培养基锑粒 99.99% metals basis

Fmoc-D-Ala-OH小鼠视网膜色素上皮细胞完全培养基锑粒 99.9999% metals basis

Fmoc-Ala-OH小鼠视网膜muller细胞完全培养基高纯 67:33 混合酸盐熔剂 99.98%,33%焦酸锂67%偏酸

Fmoc-Phe-OH小鼠虹膜色素上皮细胞完全培养基高纯 12:22 混合酸盐熔剂 99.98%,35.3 %焦酸锂64.7 %

Fmoc-D-Phe-OH小鼠晶状体上皮细胞完全培养基铜粉 99.9% metals basis,200目

N-Fmoc-L-Asparagine小鼠角膜上皮细胞完全培养基磷酸锂  99%

Fmoc-Gln-OH小鼠角膜内皮细胞完全培养基磷酸锂  99.99% metals basis

Fmoc-Asn-OH小鼠视网膜神经节细胞完全培养基偏酸锂 ≥99.99%

米诺地尔(硫酸盐)敏乐啶CD25/IL-2RA(Imterleukm-2 Receptor alpha)  CD25/白介素2-受体(抗原)SRRM1  丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白1抗体

米诺地尔(硫酸盐)敏乐啶(标准品)CD31(PECAM-1)  血小板内皮细胞黏附分子-1(抗原)SRPK2  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SRPK2抗体

C(标准品)CD34  CD34(多肽抗原)SRPK1  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SRPK1抗体

D56/NCAM1 (Neural Cell Adhesion Molecule 1)  神经细胞粘附分子1(抗原)SRGN/Chondroitin sulfate proteoglycan core protein  硫酸软骨素多糖核心蛋白抗体

(进分)CEAcam8/CD67  癌胚抗原相关细胞粘附分子8srGAP3  精神障碍相关GAP蛋白抗体

咪唑司汀CD68  CD68抗原SRG11/Spata17  凋亡基因抗体

吗替麦考酚酯/霉酚酸酯CD68  CD68(多肽抗原)SRFBP1  血清应答因子结合蛋白1抗体

吗替麦考酚酯/霉酚酸酯(标准品)CD117/c-kit/SCFR  干细胞生长因子受体/细胞表面分化抗原(抗原)SRF/SAP2/MCM1  生长激素释放因子抗体(血清应答因子)

奈拉滨CD133  造血干细胞抗原(多肽抗原)SREBP-2  胆固调节元件结合蛋白2抗体

醋酸奈西立肽CD147/EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer)  CD147(抗原)SREBP-1  胆固调节元件结合蛋白1抗体
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