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宿主细胞残留 DNA 试剂盒(磁珠法) 分子生物试剂

宿主细胞残留 DNA 试剂盒(磁珠法) 分子生物试剂

产品简介:伞枝梨头霉PCR检测试剂盒规格相关产品:
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产品型号:50T

浏览次数:306

更新时间:2022-10-14

产品厂地:上海市

详情介绍
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宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)

试剂盒简介

 

宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)用于样本的前处理,可稳定高效地提 样本中残留的痕量宿主 DNA

 

试剂盒组分

序号

规格

存条件

 

 

 

 

 

1

解液

15ml×1 

 

 

 

 

 

室温

合液(异丙醇)

洗涤液

40ml×2 

本稀释液

15ml×1 

5M NaCl

1ml×1 

白酶 K

1ml×1 

6ml×1 

洗脱液

10ml×1 

 

2

糖原

1ml×1 

-20oC

tRNA

50ul×1 

有效期: 12 个月

 

宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒验流程(手工操作):

 

 在开展实验前, 请用精密 pH  试纸条测定样本的 pH 值并将样本 pH 值调节至 6-8.

 

实验准

本准备

本消化

DNA 捕获

DNA 洗脱

 

验操作细则:

 

一、 样本处理:

1.    100ul 待检样本至 1.5ml 干净的离心管中,加入 10ul 5M  NaCl  溶液,用涡旋       荡器充分震荡 10

2.   加入 10ul 蛋白酶 K,在涡旋振荡器上充分震荡 10

3.   配制新鲜的裂解液,其组成为: 130ul  裂解液/100ul  样本, 9ul  肝糖原/100  样本, 0.2ul tRNA/100ul 样本,充分混匀以制成新鲜配制的裂解液

4.   139ul 新鲜配制的裂解液加入到样本管中, 然后用涡旋振荡器充分震荡 10 秒, 取出短 暂快速离心 5 秒,然后放置在 56oC 孵育 30 分钟;

二、 DNA 捕获:

1.     将磁珠充分涡旋振荡以*重悬;

2.     将样本管从孵育器中取出, 进行简短的离心,将液体收集到管底,然后加入*重悬的 磁珠 60ul  230ul 结合液,在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒; (注意: 在加入磁珠时, 需经 常振荡重悬磁珠, 以保证吸取时磁珠的均匀性。建议每加 3-4 组样本后, 重悬磁珠后进行 续样本的添加)

3.     将震荡后的样本管,置于旋转混匀器或涡旋振荡器上 10 分钟以进行磁珠捕获;

4.     将样本管从旋转混匀器上取下,在 10000g 的条件下离心 1 分钟使磁珠充分聚集;

5.     将离心后的样本管置于磁力架上, 待溶液*澄清后, 用枪头小心移去上清(注: 避免 搅动磁珠,使得磁珠同上清一起被除去从而影响得率);

宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒 洗涤:

1.     样本管移去上清后,不必将样本管从磁力架上取下,直接加入 400ul 洗涤液;

2.     待溶液*澄清后,磁珠*分离,用枪头小心移去上清;

 

 

3.     保持样本管在磁力架上, 加入 400ul 洗涤液, 待溶液澄清, 磁珠*分离后, 用枪头小 心移去上清

4.     将样本从磁力架上取下, 10000g 的条件下离心 30 秒,使得残留的洗涤液*聚集 到管底;

5.     将样本管置于磁力架上,待磁珠*分离后,用 10ul 枪头小心移除残留的液体;

6.     将样本管从磁力架上取下,置于 70oC 金属浴中,放置 4 分钟, 除去残留的乙醇(注 干燥不够, 残留的乙醇会影响后续的定量检测反应);待磁珠团出现裂纹时,将样本管从 金属浴中取出进行 DNA 洗脱;

 DNA 洗脱:

1.     沿着样本管的管壁加入 50- 100ul 洗脱液,用 100ul 的枪头反复吹吸,以*重悬磁珠;

2.     将样本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分钟;

3.     将样本管从孵育器中取出,于 20000g 离心 2 分钟,然后至于磁力架上,待磁珠*分 离后,用 10ul 枪头小心将上清液体转移至新的干净的离心管中;

4.      为了避免吸入磁珠,在离心管中还剩余少量液体时,将其于 20000g 离心 2 分钟,然后 至于磁力架上以吸出剩余的液体

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