Bradford蛋白浓度测定试剂盒操作说明

Bradford蛋白浓度测定试剂盒操作说明：

一．微孔酶标仪法

1. *溶解蛋白标准品，取 10μL，稀释至 250μL ，使终浓度为 0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9%NaCl 或PBS 稀释标准品。

2. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 1ml 5×G250 染色液，加入 4ml 双蒸水，混匀成 1×G250染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

3. 将标准品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到 96 孔板中，加 PBS 稀释液补足到 20 微升。

4. 将样品作适当稀释（多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释），加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2后。

5. 各孔加入 200 微升稀释后的 1×G250 染色液，室温放置 3-5 分钟。

6. 用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。

7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二．分光光度计法

如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下：

1. 取八支（或者更多）干净的 10ml 离心管，标记上号。

2. 取 100μLBSA 加入 PBS 2.4ml 稀释至终浓度为 0.2mg/ml。

3. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 10ml 5×G250 染色液，加入 40ml 双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

4. 按下表加入试剂(以每孔 5ml 计，多余的用来清洗比色皿)。

5. 反应 3 分钟后测 OD 值。为了实验的准确性，可每间隔 2 分钟加一管染色液，每间隔 2 分钟测一管 OD 值。