技术文章 / article 您的位置:网站首页 > 技术文章 > 气管比翼线虫PCR检测试剂盒试剂准备

气管比翼线虫PCR检测试剂盒试剂准备

发布时间: 2021-03-10  点击次数: 58次

气管比翼线虫PCR检测试剂盒试剂准备:

1. DNA模板

2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶操作步骤 

1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物1(10pM)               2μl

       引物2(10PM)              2μl

       Taq酶(2U/μl)            1μl

      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl

      加ddH2O至               50 μl

    视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。

3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

联系我们

上海联祖生物科技有限公司 公司地址:上海松江区莘砖公路518号5号楼601室   技术支持:环保在线
  • 电话:021-61210612
  • QQ:3191886983
  • 手机:13482402338 微信同号
  • 邮箱:3191886983@sdkjfhkjsdhfqq.com

扫一扫 更多精彩

微信二维码

联系我们

contact us

扫一扫,关注我们

返回顶部