Bcap-37人乳腺癌细胞实验操作步骤

　　Bcap-37人乳腺癌细胞实验操作步骤：
 

　　在完成Bcap-37人乳腺癌细胞的复苏与传代后，下一步是进行细胞接种与药物处理实验。以下是具体的操作流程：
 

　　1. 细胞计数与接种
 

　　- 使用血球计数板或自动细胞计数仪对悬浮的Bcap-37细胞进行计数，调整细胞密度至所需浓度(通常为5×10⁴~1×10⁵ cells/mL)。
 

　　- 根据实验设计，将细胞均匀接种于6孔板、96孔板或其他培养器皿中，每孔加入适量培养基(如DMEM+10% FBS)，确保细胞分布均匀。
 

　　2. 药物处理
 

　　- 待细胞贴壁并生长至60%~70%汇合度时(约24小时后)，进行药物处理。
 

　　- 根据实验方案配制不同浓度的待测药物(如化疗药物或靶向抑制剂)，用无菌PBS或培养基稀释至工作浓度。
 

　　- 小心吸除原培养基，避免扰动细胞层，随后加入含药物的新鲜培养基，同时设立空白对照组(仅加培养基)和溶剂对照组(如DMSO)。
 

　　3. 培养与观察
 

　　- 将培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，分别在24h、48h或72h等时间点观察细胞状态。
 

　　- 使用倒置显微镜记录细胞形态变化，注意是否有凋亡(如细胞变圆、脱落)或坏死(如碎片增多)现象。
 

　　4. 后续检测
 

　　- 根据实验目的，可选择MTT法检测细胞活力，或通过Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析凋亡率。
 

　　- 若需提取蛋白或RNA，需在药物处理后及时裂解细胞，避免降解。
 

　　注意事项
 

　　- 药物浓度需通过预实验确定，避免过度毒性或无效剂量。
 

　　- 操作时严格无菌，防止污染影响结果。
 

　　- 每组实验建议设置3个复孔，确保数据可靠性。
 

　　通过以上步骤，可系统评估药物对Bcap-37细胞的抑制作用，为后续机制研究提供基础数据。