MVP主要穹窿蛋白ELISA试剂盒

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

乙酰肝素(HPA)试剂盒定N-苄氧羰-L-色氨 98%正戊酰 98%

乙酰肝素(HPA)试剂盒红素氟 99.99% metals basis AR,50 % in H2O

Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)试剂盒 吉氟 AR,40.0%DL-3-氨丁 97%

Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)试剂盒 素葡萄糖，一水 98%(S)-3-氨-1,2- 98%

纤维连接素相关抗原(FRA)试剂盒 内酯葡萄糖，一水 USP,药用级 N-乙酰-D-缬氨 97%

纤维连接素相关抗原(FRA)试剂盒 内酯玉米淀粉 药用级5-氨戊 97%

胃泌素抗体(GCA)试剂盒 内酯三溴化 99.999%N-乙酰-L-异亮氨 98%

胃泌素抗体(GCA)试剂盒 乙素三溴化 99.9%DL-2-氨丁 99%

谷氨脱氢(GDH/GLDH)试剂盒 雷帕三氟化乙络合物 98%DL-α-氨异丁  98%

谷氨脱氢(GDH/GLDH)试剂盒 类叶升麻三氟化乙 46.5%BOC-L-缬氨 99%

肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)试剂盒 藜芦三氟化乙 98%BOC-D-丝氨 98%

肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)试剂盒 藜芦三氟化四络合物 48-50%溶液1-苄哌 97%

胆(CA)试剂盒 藜芦三氟化乙络合物 97%BOC-D-缬氨 98%

胆(CA)试剂盒 藜芦三氟化络合物 50-52 wt% BF3 巴豆 98%

幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)试剂盒里奥林丹皮酚 99%Fmoc-beta-氨 99%

幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)试剂盒利卡灵-B叔丁 GR，≥99.5% (GC)N-羟硫代琥珀酰亚 98%
MVP主要穹窿蛋白ELISA试剂盒KOD DNA polymerase 是从克隆有α –型高保真DNA聚合酶的大肠杆菌中分离纯化所得，具有3`→5`核外切酶活性，保真性能比普通Taq聚合酶高80倍。具有较高的延伸速率，在推荐的条件下大于每分钟2kb，PCR产物为平端，可与直接接入本公司Blunt平端连接载体中。用于高保真、快速扩增目标DNA，环拉法引入点突变，补平DNA粘性末端等。

经酶切实验检测无外源核酶污染，PCR方法未检测到宿主DNA残留，能够有效扩增大肠杆菌基因组DNA。

酶活定义：

在推荐的缓冲反应体系中，以大马哈鱼精DNA为模板，68℃、30min内合成10nmol核所需要的酶量为一个活性单位。

保存条件：

储存溶液为：50mM Tris-HCl（pH7.6），50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50%(V/V) glycerol，－20℃存放一年，无明显活性丧失。冰袋运输 。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。