TGFBR3转化生长因子β受体3ELISA试剂盒

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

产品属性：

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

金属硫蛋白(MT)试剂盒灰毡毛忍冬皂乙四丁氢氧化铵 ~40% 水溶液，离子色谱级2--1,3-二化咪唑鎓 90%

金属硫蛋白(MT)试剂盒茴芹内酯2,4,5-三 分析标准品代二哌啶碳鎓六氟磷盐 98%

小扁豆素结合型胎蛋白/胎蛋白异质体3(AFP-L3)试剂盒茴香脑叔戊 97%代三吡咯烷鏻六氟磷盐 98%

小扁豆素结合型胎蛋白/胎蛋白异质体3(AFP-L3)试剂盒肌氨DL-α-酚琥珀酯 分析标准品多肽试剂TCTU 98%

小扁豆素结合型胎蛋白/胎蛋白异质体2(AFP-L2)试剂盒肌三氧鎓四氟盐 96%2--1,3-二咪唑六氟磷盐 98%

小扁豆素结合型胎蛋白/胎蛋白异质体2(AFP-L2)试剂盒(三硅烷)重氮 2.0M 己烷溶液3-(二乙氧磷酰氧)-1,2,3-苯并三-4- 98%

小扁豆素结合型胎蛋白/胎蛋白异质体1(AFP-L1)试剂盒鸡屎藤三(2-氨乙) 97%代磷二乙酯 纯度 ≥90%

小扁豆素结合型胎蛋白/胎蛋白异质体1(AFP-L1)试剂盒鸡屎藤酯2-硫脲嘧啶 分析标准品2-(2-吡啶-1-)-1,1,3,3-四脲四氟盐  99%

黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)试剂盒鸡屎藤四己硫氢铵 用于离子色谱, ≥99.0% (T)N,N'-二环己碳二亚 99.0%

黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)试剂盒积雪草N,N,N',N'-四-1,3-二 99%N,N'-琥珀酰亚碳酯 98%

高分子量角蛋白(CK-HMW)试剂盒积雪草N,N,N',N'-四-1,3-二 97%4-二氨吡啶 99%

高分子量角蛋白(CK-HMW)试剂盒吉马替康2,4,5-三苯 分析标准品,99%4,4'-二氧三苯 98%

肝癌抗原(PHC)试剂盒吉马1,2,3,4-四苯 分析标准品,98%4,5-二咪唑 98%

肝癌抗原(PHC)试剂盒吉妥辛5-硫代-D-葡萄糖 96%4,5-二咪唑 99%

凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)试剂盒 三溶液 50%溶液二吡咯烷(N-琥珀酰亚氨氧)碳六氟磷盐  98%

凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)试剂盒 加兰他敏二十三烷 分析标准品,99.5%4-(4,6-二氧三)-4-吗啉盐盐 97%
TGFBR3转化生长因子β受体3ELISA试剂盒荧光染料CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFSE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE在结构上将酚羟基部位改造成AM 体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的CFSE的AM 部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE 进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光强。

在细胞分裂增殖过程中，CFSE的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。CFSE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪(FL1 通道)根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次(1/2的荧光强度)，二次(1/4的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。CFSE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFSE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。

CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。CFSE 毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。

CFSE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK 细胞等其它细胞的增殖检测。

CFSE标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=496 nm,λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

储存条件：CFSE须-20℃避光保存，注意防潮。

有效期：六个月。