aFABP脂肪细胞脂肪酸结合蛋白ELISA试剂盒

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

色素b561(cytb561)试剂盒异鼠李素-3-O-葡萄糖3-溴 98%4--3-氟苯 97%

色素b561(cytb561)试剂盒异鼠李素-3-O-新3-溴 分析标准品，用于环境分析3-苯  98%

脂质运载蛋白2(LCN2)试剂盒异环溴 98%2- 97%

脂质运载蛋白2(LCN2)试剂盒异甜菊叔丁二苯硅烷 98%3-苯  97%

脂肪型脂肪结合蛋白(aFABP)试剂盒异土木香内酯俾斯麦棕Y Biological stain4-苯  97%

脂肪型脂肪结合蛋白(aFABP)试剂盒异内酯2--3-硝吡啶 >99.0% (HPLC)3-羧-4-氟苯 97%

磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)试剂盒异戊二烯2-羟吡啶 97%3-羧-5- 97%

磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)试剂盒异夏佛塔桑色素 Indicator3--4- 97%

葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)试剂盒异香兰素桑色素 分析标准品，≥983--4-氧苯 95%

葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)试剂盒异香兰2--3-三氟 99%3,5-二氟苯 98%

视黄结合蛋白(RBP)试剂盒异银杏双黄  ≥99.0% (HPLC)2,4-二苯  98%

视黄结合蛋白(RBP)试剂盒异樱花亭标准溶液 1000μg/ml，溶剂：3,5-二苯 98%

8羟脱氧鸟(8-OHdG)试剂盒异泽兰黄素 植物培养级，>99.0% (HPLC)二苯并噻吩-4- 95%

8羟脱氧鸟(8-OHdG)试剂盒异紫花前胡内酯,二水 99%3,4-二苯 97%

羟赖氨(Hyl)试剂盒异紫堇定苯 97%3,4-二氟苯 98%

羟赖氨(Hyl)试剂盒益母草罗丹明6G Biological stain2,3-二苯 97%
aFABP脂肪细胞脂肪酸结合蛋白ELISA试剂盒本品以的吉姆萨色素、甲醇为主要原料，含*衬染剂，经研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。经常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色。吉姆萨染色液由吉姆萨贮存液(10×)和磷盐缓冲液组成，10×贮存液可以单独使用，也可以1:9混合成工作液后使用。

吉姆萨色素是由天青Ⅱ与伊红混合而成。吉姆萨染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，吉姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对细胞核着色偏深,核结构显色不佳，故吉姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。

一、一步法涂片染色

1、吉姆萨工作液的配制：

按吉姆萨贮存液(10×):磷盐缓冲液=1:9混合，即取1份吉姆萨储存液(10×)加入到9份的磷盐缓冲液中充分混匀，即为吉姆萨工作液，该工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。

2、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定1-3分钟。

3、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加吉姆萨工作液覆盖涂片，室温滴染。

4、用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。

5、干燥、镜检。

6、染色结果：

嗜性颗粒————粉红色；

嗜碱性颗粒————紫蓝色；

中性颗粒—————淡紫色

二、两步法涂片染色

1、吉姆萨工作液的配制：

按吉姆萨贮存液(10×):蒸馏水=1:4混合，即取1份的吉姆萨贮存液(10×)加入到4份的蒸馏水中充分混匀，即为吉姆萨工作液。吉姆萨工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。

2、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定。

3、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加适量吉姆萨工作液覆盖涂片，室温滴染。

4、加入等量磷盐缓冲液，轻轻晃动载玻片，室温静置。

5、用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。