ADIPOR2脂联素受体2ELISA试剂盒

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

产品属性：

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

磷脂酰丝氨(PS)试剂盒异甘草硝铑溶液 5 % 溶液2,4-二溴苯 98%

磷脂酰丝氨(PS)试剂盒异甘草素三化钌 水合物 38.0-42.0% Ru basis2,4-二溴苯 97%

胆磷甘油酯(PC/CPG)试剂盒异钩藤二四氨钯 Pd ≥43.0%2,5-二氧溴苯 98%

胆磷甘油酯(PC/CPG)试剂盒异古伦宾4-乙酰吗啉 98%4-溴-2-氟苯 98%

总胆汁(TBA)试剂盒 异荭草二乙氨乙 99%2-溴-4-氟 98%

总胆汁(TBA)试剂盒 异槲皮N-酰吗啉 99%3,4-二溴苯 97%

载脂蛋白C3(Apo C3)试剂盒异黄腐4-(2-羟乙)吗啉 99%3,4-二溴苯 70%

载脂蛋白C3(Apo C3)试剂盒异黄芪皂I1-（2-羟乙）哌啶 99%4-苄氧-3-氟苯 98%

胆固(CH)试剂盒异黄芪皂IIN-吗啉 GR，99%2-苄氧苯 96%

胆固(CH)试剂盒异茴芹内酯N-二乙 99%3-苄氧苯 98%

金属硫蛋白2(MT2)试剂盒异莨菪亭N-吗啉-N-氧化物 50%水溶液3-联苯 98%

金属硫蛋白2(MT2)试剂盒异类叶升麻β-巯乙 生物技术级 （剧品）3,4-二氧溴苯 98%

可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)试剂盒异连翘酯Aβ-巯乙 AR,99.0%（剧品）3,4-二溴苯 99%

可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)试剂盒异莲心β-巯乙 CP,95.0%（剧品）4-苄氧-2-氟苯 96%

3-硝酪氨(3-NT)试剂盒异龙脑钛钡 粉末,<2 μm, 99.5% metals basis2-联苯 97%

3-硝酪氨(3-NT)试剂盒异绿原A化钡，二水 CP,99%4-(Boc-氨)苯 97%
ADIPOR2脂联素受体2ELISA试剂盒革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。首先，细菌经初染剂结晶紫初染成蓝紫色，再加媒染剂与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。

革兰氏阳性细菌（G+）的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用脱色剂脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。而革兰氏阴性菌（G-）细胞壁类脂含量较多，肽聚糖层较薄且肽聚糖为平面片层结构，易被脱色剂溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经复染液复染为红色。

1. 将涂片在火焰上固定，滴加R1 初染剂染1 分钟，水洗。

2. 滴加R2 媒染剂作用1 分钟后水洗。

3. 滴加R3 脱色剂，此时应将玻片不时摇动，直至无紫色脱落为止，染30 秒钟，水洗，水流不可太大。

4. 滴加R4 复染液染色30 秒，水洗，待干，镜检。

染色结果：革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为红色。