FEP游离原卟啉ELISA试剂盒

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

假定蛋白LOC677340 试剂盒二氢愈创木脂异酯  97%2,4-二苯  98%

假定蛋白LOC677340 试剂盒二萜酯 98%（剧品）2-巯苯并噁唑 98%

假定蛋白LOC433328 试剂盒二氧马钱酯苯酯 98%直接红80 AR

假定蛋白LOC433328 试剂盒二乙-(+)-松脂酯二 Standard for GC，>99.8%（T)间乙 98%

髓样分化因子初次应答因88(MYD88)试剂盒二乙长叶九里香内酯二酯二 AR,99.5%辛二 99%

髓样分化因子初次应答因88(MYD88)试剂盒二乙丁香树脂酯二 CP,98%2,2,6,6-四哌啶-1-氧 98%

干扰素活化因205(Ifi205)试剂盒二乙松属素酯二 分析标准品5-氟 99%

干扰素活化因205(Ifi205)试剂盒番石榴二叠氮磷二苯酯  97% 二酰 98%

组织相容性2-K1-K 区(H2-K1)试剂盒反式-异扁柏脂素叠氮三硅烷 93%氟硅铵 CP

组织相容性2-K1-K 区(H2-K1)试剂盒蜂蜜曲菌素3- 98%六氟钛，水溶液 50%水溶液

白免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)试剂盒覆盆子异磺酰酯 98%2-溴间二苯 97%

白免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)试剂盒橄榄树脂素三聚 99%溴乙苄酯 96%

C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)试剂盒高根二1,3-二氨胍盐盐 97%溴乙 CP,98.0%

C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)试剂盒高良姜萜内酯氢钠 95%溴乙 AR,98.5%(GC)

假定蛋白LOC677168 试剂盒根皮含柘树咕吨 D二钠 96%溴乙 分析标准品

假定蛋白LOC677168 试剂盒根皮含柘树咕吨 L氢钠 1.0 M in THF溴乙 Standard for GC,≥99.5% (GC)
FEP游离原卟啉ELISA试剂盒Rhodamine 123染色液可用于细胞凋亡检测，Rhodamine 123 是一种细胞通透性的、阳离子的荧光探针，容易被有活性的线粒体摄取，没有细胞毒性，Rhodamine 123由于带阳离子所以当线粒体膜电位存在的时候就会透过细胞膜在活细胞的线粒体内聚集，发出黄绿色荧光，而当膜电位下降的时候，聚集的Rhodamine 123 就减少，从而发光强度降低。

Rhodamine 123 常与Cy5和AMCA (Aminomethylcoumarin Acetate)等组合进行多色荧光分析,相互间无颜色交叉;分析细胞凋亡时,可用Rhodamine 123 来检测线粒体的膜电位,而用NAO 来检测线粒体结构的完整性。Rhodamine 123，可用于对许多种细胞进行染色，包括植物细胞和细菌。由于细胞内ATP的量与Rhodamine 123的荧光强度之间有相关性，Rhodamine也可应用于检测细胞内的ATP。

储存条件：4℃避光保存。长期保存-20℃避光保存。

有效期：六个月。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。