PYCARD细胞凋亡相关斑点样蛋白ELISA试剂盒

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

产品属性：

需要而未提供的试剂和器材：

1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等。

备试剂与收集血样：

1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

样本实验前准备：

ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

（5）培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（6）组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

超氧化物歧化1(SOD1)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）-2-氨乙磺钠盐乙正酯 AR,99.0% 萘唑啉盐盐 99%

成骨生长肽/成骨多肽(OGP)联免疫吸附测定试剂盒 N-三（羟）-2-氨乙磺钠盐 AR吲哚-5-羧 98%

成熟促进因子(MPF)联免疫吸附测定试剂盒 N-三（羟）-2-氨乙磺钠盐 99.6%，1μm造沸石 CP,97%

成纤维生长因子23(FGF23)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）-3-氨磺 99.8%,10μm,,高白度2-乙盐盐  98%

成纤维生长因子9(FGF9)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）-3-氨磺 99.8%,25μm氧盐盐 98%

成纤维生长因子结合蛋白1(FGFBP1)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）-3-氨磺邻苯二丁苄酯 分析标准品2,2,3,3-四氟烯酯  97%,含50ppm BHT稳定剂

成纤维生长因子结合蛋白2(FGFBP2)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）-3-氨磺钠盐邻苯二丁苄酯标准溶液 1000μg/ml，溶剂：环庚三烯酚 98%

成纤维生长因子受体底物2(FRS2)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）-3-氨磺钠盐邻苯二丁苄酯 98%2-氨-5--2'-氟二苯 98%

成纤维生长因子受体底物3(FRS3)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）-3-氨磺钠盐过氧化氢异苯 80-85 %2-氨-5-溴-2'-氟二苯 98%

迟现抗原(VLA)联免疫吸附测定试剂盒 N-三（羟）氨-2-羟磺过氧化环己  50%邻苯二二辛酯溶液α-溴邻 98%

穿孔蛋白1/成孔蛋白(PRF1/PFP)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）氨-2-羟磺硬脂钙 Ca 6.6-7.4%11-溴十一 98%

卵泡激素受体(FSHR)联免疫吸附测定试剂盒 N-三（羟）氨-2-羟磺二苯二聚酯 80%11-溴十一 98%

垂草扁桃(VMA)联免疫吸附测定试剂盒 N-三（羟）氨-2-羟磺钠盐2-乙己二苯磷酯 90%4-丁 98%

角质转谷氨酰(TGM1)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）氨-2-羟磺钠盐硬脂锂 90%2,3-二乙酯 97%

垂体腺环化激活肽受体 (PACAPR)联免疫吸附测定试剂盒N-三（羟）氨-2-羟磺钠盐硬脂镁 AR，Mg 4.0-5.0%2-羟苯乙 98%

肝配蛋白A受体10 (EPHA10)联免疫吸附测定试剂盒3-[N，N-双（2-羟乙）]氨-2-羟磺硬脂钠 USP级2-氨3,5-二溴苯酯 98%
PYCARD细胞凋亡相关斑点样蛋白ELISA试剂盒用途：

用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的GUS基因表达。

注意事项：

染色原理是适宜的反应条件下，β-葡萄糖酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。

储存条件：-20℃，避光，12个月