非洲马瘟病毒RT-LAMP检测试剂盒说明书

参数规格：
产品名称：非洲马瘟病毒RT-LAMP检测试剂盒说明书
英文名称：RT-LAMP kit for African equine plague virus
货号：LZ-L87410
产品规格：50次
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

 储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
优势：
   1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保
所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测。
   2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证。
   3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
   4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
   5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
   6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

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TOV21G人卵巢癌细胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%
大鼠肾小球系膜细胞hbzy-1 Rat mesangial cell hbzy-1 DMEM(高糖）+10%FBS(或者EMEM+10%FBS)
MLE-12小鼠肺上皮细胞株 MLE-12 mouse lung epithelial cell lines DMEM/F12+2%FBS
MA104非洲绿猴胚胎肾上皮细胞 MA104 Africa green monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS　
NCI-H266人非小细胞肺癌细胞 NCI-H266 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS
MCA38小鼠结肠癌细胞 MCA38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS
NCI-H23人非小细胞肺癌细胞 NCI-H23 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS
LTPA小鼠胰腺癌细胞 LTPA mouse pancreatic cancer cells 1640+10%FBS
BALL-1人B淋巴细胞急性白血病细胞 BALL-1 B acute lymphoblastic leukemia cells 90%RPMI1640（内含2mM L-glutamine）+10%胎牛血清
AML-12小鼠正常肝细胞 Normal liver cells of AML-12 mice DMEM+10%FBS
HCC-LM3人肝癌细胞 HCC-LM3 human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS
MC38小鼠结肠癌细胞 MC38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS
Caki-2 人肾透明细胞癌细胞 Caki-2 human renal clear cell carcinoma cells McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS
BV-2小鼠小胶质细胞 Microglial cells of BV-2 mice 1640+20%FBS
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。