猪链球菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
羟基纤维素（4000mpas）RECK (D8C7) Rabbit mAb2-氟磺酰

麦芽糖;淀粉糖Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb2-磺酰

ONX-0914 (PR-957)Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb炔联

N-壬酰基-N-甲基葡萄糖(MEGA9)Flotillin-2 (C42A3) Rabbit mAb间异酸酯

甲基纤维素(100000mPa.s)AMPA Receptor 3 (GluA 3) Antibody2-(*硅基)

甲基纤维素(4000 mPa.s)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb三钠

对基-β-D-吡喃半糖苷(PNPG)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb2 , 二溴-5-甲基吡

D-核糖(标准品)Notch1 (C37C7) Rabbit mAb三氟磺酸银

D-核糖Chk2 (1C12) Mouse mAb三氟肼盐酸盐

二硫苏糖(DTT)Chk2 (1C12) Mouse mAb5-溴-2-氟

D(+)-松二糖Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjuga)氟肼盐酸

D-果糖-1,6-二酸三钠盐GOT1 (E4A4O) Rabbit mAb2-氟-甲基-5-溴吡啶

海带多糖；昆布糖 (来自褐藻类)S100A9 (D5O6O) Rabbit mAb (IHC Formulad)L-甘氨酸

胰酶(1:250)，胰酶粉Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb巯基酸甲酯

木瓜蛋白酶(800u/mg)Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb2-氨基-5-甲酸

木瓜蛋白酶(2000u/mg)HA-Tag (6E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-烟酸

胰酶(1:2500)GST (26H1) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,二甲

胰酶(1:4500)Notch3 (8G5) Rat mAb2-巯基-5-甲基-1,3,噻二唑

活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒RGS2  G蛋白信号转导调节因子2100 ul

活化凝血因子X(FXa)ELISA试剂盒RGS5  G蛋白信号转导调节因子520 ul

活化蛋白C(APC)ELISA试剂盒RhoA  RhoA100 ul

磺基转移酶(SULT1A1)ELISA试剂盒Rho C  RhoC20 ul

黄体生成素(LH)ELISA试剂盒RIP2  受体结合丝氨酸苏氨酸激酶2100 ul

氧化酶(XOD)ELISA试剂盒Phospho-RIP2 (Ser176)  酸化受体结合丝氨酸苏氨酸激酶2100 ul

环酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒RIP3  受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3100 ul

环酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒RICTOR  雷帕霉素靶蛋白复合体2100 ul

环加氧酶2(COX-2)ELISA试剂盒Phospho-Rictor (Thr1135)  酸化雷帕霉素靶蛋白复合体2100 ul
猪链球菌PCR检测试剂盒规格流感病毒H3N2血凝素抗体Diosbulbin C中文名：别名：分子式：C19H22O7

艾滋病病毒抗体Jatrophane 6中文名：别名：分子式：C37H48O14

瘤病毒16型L2抗体Coronarin D中文名：别名：15-Hydroxy-8(17),12-labdadien-16,15-olide分子式：C20H30O3

HOMER2抗体Jatrophane 1中文名：别名：分子式：C36H4513

解旋酶样转录因子抗体5,8,9,14-Tetraacetoxy-3-benzoyloxy-10,15-dihydroxypepluane中文名：别名：分子式：C35H46O12
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。