志贺氏菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
双(2,二基)草酸酯(>98.0%(T))Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) Antibody2-溴-3'-酮

草酸双[2,4,5-三-6-(戊氧羰基)基]酯(>98.0%(HPLC))p53 (D2H9O) Rabbit mAb (Rodent Specific)硫代甲酰

8-氨基-1,3,6-萘三磺酸二钠盐水合物(>99.0%(HPLC)(T))Flotillin-1 Antibody2--甲基-5-硝基吡啶

8--1-萘磺酸(>95.0%(HPLC)(T))TTK Antibody2-氟-吡啶

ANS-NH4(8-基-1-萘磺酸铵)(>95.0%(HPLC)(T))TTK Antibody硫代卡巴肼

ANS-Na(=8-基-1-萘磺酸钠)(>97.0%(N))Cleaved-PARP (Asp214) (E2T4K) Mouse mAb(S)-2,2-二甲基-1,二氧戊环-甲

ANS-Mg(=8-基-1-萘磺酸镁)(>98.0%(HPLC)(T))CLK3 Antibody4,6-二甲基-2-巯基嘧啶

 102(>97.0%(HPLC)(N))DNMT3A (D2H4B) Rabbit mAb2,二酮

 314(>98.0%(HPLC)(N))VRK3 Antibody(R)-(+)-alpha,alpha-二基脯氨

化荧光素(>90.0%(HPLC))eIF3J Antibody月桂硫酸酯铵盐

2',7'-二荧光素(>95.0%(HPLC))Human CD40 Ligand (hCD40L)甲氧基水杨酸

2,二氨基萘(>98.0%(GC)(T))Blk Antibody1-甲基-基

溴甲菲啶(>95.0%(HPLC)(N))eIF6 Antibody3,3,三氟-1-

7-(二甲基氨基)-甲基(>95.0%(GC)(T))Ero1-Lα Antibody人参皂苷 Rg1

7-(二甲基氨基)-三氟甲基(>97.0%(GC)(T))Ero1-Lα Antibody1,5-萘二

2,二基马来酸酐(>95.0%(GC))VCAM-1 (D2T4N) Rabbit mAb (Mouse Specific)山梨酸

7-(二基氨基)-羧酸(>98.0%(GC)(T))EGF Receptor (V279) Antibody2--5-甲基嘧啶

[[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)(3,5-二甲基-2H-吡咯-2-亚基)甲基]](二氟烷)(>98.0%(GC))ROS1 (69D6) Mouse mAb2,5-二嘧啶

颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒phospho-Akt(Thr308)  酸化蛋白激酶B100 ul

抗中性粒细胞核周(pANCA)ELISA试剂盒phospho-Akt (Thr450)  酸化蛋白激酶B500 ul

抗中性粒/中心体(ACA)ELISA试剂盒Phospho-HDAC4(Ser246)/HDAC5(Ser259)/HDAC7(Ser155)  酸化组蛋白去酰化酶4、5、7100 ul

抗增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA试剂盒Phospho-HDAC4(Ser632)/HDAC5(Ser498)/HDAC7(Ser486)  酸化组蛋白去酰化酶4、5、7100 ul

抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒PKN2  蛋白激酶N220 ul

抗血小板IgA(PA-IgA)ELISA试剂盒RKIP  Raf激酶抑制蛋白100 ul

抗血小板(IgM)ELISA试剂盒PKR  蛋白激酶R20 ul

抗血小板(IgG)ELISA试剂盒Phospho-PKR (Thr446)  酸化蛋白激酶R100 ul

抗心脂IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒Phospho-PKR (Thr451)  酸化蛋白激酶R100 ul
志贺氏菌PCR检测试剂盒规格辅酶Q10B抗体cis-Methylisoeugel中文名：顺式甲基异丁香酚别名：Liquid分子式：C11H14O2

细胞因子受体样因子1抗体p-Coumaric acid ethyl ester中文名：对香豆酸乙酯别名：Ethyl p-coumarate分子式：C11H12O3

半胱氨酸亚磺酸脱羧酶抗体erythro-Guaiacylglycerol中文名：别名：分子式：C10H14O5

神经网蛋白CopineVI抗体3,4-Diacetoxycinnamamide中文名：3,4-二乙酰氧基肉桂酰胺别名：分子式：C13H135

猪瘟病毒包膜糖蛋白E2抗体Tatariid A中文名：别名：分子式：C12H16O5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。