即用型PCR试剂盒（染料法）

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
二甲氨基甲酸(>98.0%(HPLC)(T))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb2-氧代环戊基酸酯

5-(甲氧羰基基)-10,15,2-三基卟吩(>90.0%(HPLC))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb5-硝基吲哚-2-酮

2-萘甲酸(>98.0%(GC)(T))Basic FGF (19A9) Rabbit mAb2-噻吩

2-萘甲酰(>98.0%(GC)(T))EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb2-氟-溴-5-氨基吡啶

甲酸(>99.0%(GC)(T))PKM2 Antibody2-氨基腺嘌呤核苷

联基-羧酸(>98.0%(T))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2,4,5-三氟

基甲酰(>98.0%(GC)(T))SynGAP Antibody氨基-5-氟吡啶

二甲基氨基肉桂(>98.0%(T))Yes Antibody2-氟三氟甲氧基

2,萘二羧酸酐(>95.0%(GC)(T))eNOS (D9A5L) Rabbit mAb-2-氟

N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基烷(>97.0%(GC))Androgen Receptor Antibody2--氟

[(叔丁氧羰氨基)甲基]吡啶-2-羧酸(>96.0%(HPLC)(T))CDK9 (C12F7) Rabbit mAb (PE Conjuga)5,6-二甲氧基茚酮

双(锌卟啉)(约5μmol/L的二溶液) Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb肉桂基

双(锌卟啉)(约5μmol/L的二溶液)Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb溴联

五亚甲基双[(10,15,20-三卟吩-5-基)甲酸]二锌(Ⅱ)(>97.0%(HPLC))Pyruva Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAb6-溴吡啶-2-羧酸酯

全氟三丁(>60.0%(GC))Pyruva Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAbN,N,N',N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟酸盐

2,4,6-三(十五氟庚基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))GPX1 Antibody二甲氨基酮

2,4,6-三(五氟基)-1,3,5-三(>95.0%(GC))AMACR (2A10) Mouse mAb5-氨基-1H-咪唑-酰

2,4,6-三(七氟基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))AP-2α Antibody2-氧基酸

鸡L氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒phospho-PKC delta (Thr505)  酸化蛋白激酶C亚性D型100 ul

鸡HSP90(IgM)ELISA试剂盒phospho-PKC delta (Tyr311)  酸化蛋白激酶C亚性D型20 ul

鸡HSP90(IgG)ELISA试剂盒PLAU/uPA  尿激酶型纤溶酶原激活因子100 ul

鸡HSP72(IgM)ELISA试剂盒PLAUR  尿激酶型纤溶酶原激活因子受体100 ul

鸡HSP72(IgG)ELISA试剂盒PLG  纤维蛋白溶酶原100 ul

鸡HSP60(IgM)ELISA试剂盒Plexin A1  神经丛蛋白A1100 ul

鸡HSP60(IgG)ELISA试剂盒Plexin A2  神经丛蛋白A2100 ul

鸡HSP27(IgG)ELISA kiPlexin B1  神经丛蛋白B11 Kit

鸡HSP27 IgM ELISA试剂盒Plectin  网蛋白100 ul
即用型PCR试剂盒(染料法)ASTE1蛋白抗体Tetrahydropalmatine中文名：延胡索乙素别名：(+)-Tetrahydropalmatine; 右旋四氢巴马汀分子式：C21H254

锚蛋白重复结构域蛋白17抗体L-Carnitine中文名：左旋肉碱别名：分子式：C7H153

胞质乙醛脱氢酶1抗体Glutathione中文名：谷胱甘肽别名：分子式：C10H17N3O6S

ADP核糖基化样因子ARL3抗体Melatonin中文名：褪黑素别名：分子式：C13H16N2O2

内收蛋白a1抗体Dehydroevodiamine hydrochloride中文名：去氢吴茱萸碱盐酸盐别名：分子式：C19H16N3O
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。