鸭瘟病毒PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
邻二标准溶液(1000μg/ml,溶剂：甲)Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (PE Conjuga)芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯

邻二(标准品)Survivin Antibody双-（1，5-环辛二）镍

1,2-二烷(标准品)Hexokinase I Antibody3,5-二氟甲酰

邻二甲酸二酯(标准品)SH2D1A (XLP 1D12) Rat mAbN-1-Boc-2-哌甲酸甲酯

二异(分析标准品,>99.5%(GC))WAVE-3 Antibody氧化银

间二(分析标准品,用于环境分析)Complexin-1/2 (D8A6E) Rabbit mAb氨甲基四氢吡喃

邻二甲酸二正辛酯标准溶液(1000μg/ml,基体：甲)INCENP (P240) Antibody四酰核糖

邻二甲酸二正辛酯(分析标准品,>99%(GC))Survivin (71G4B7) Rabbit mAb5-酰氨基-7,8,9-O-三酰基-2,6-脱水-叠氮-3,4,5-三脱氧-D-甘油-D-半-2-壬酸甲酯

邻二甲酸二环己酯(标准品)Survivin (71G4B7) Rabbit mAb溴甲基

4,4'-二氨基二(标准品)Survivin (71G4B7) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)N-苄氧羰基-去甲托品酮

邻二甲酸二壬酯(标准品)SET7/SET9 Antibody氧化镝

邻二甲酸二正戊酯(标准品)SET7/SET9 Antibody3'-羟基酮

邻二甲酸二丁酯(标准品)RecQ4 Antibody氢氧化

邻二甲酸二丁酯标准溶液(200ug/ml,基体：甲)Grp75 Antibody氢氧化锂

2,二氨(分析标准品,>99%)MLK3 Antibody2,6-二氨基蒽醌

3,3'-二甲氧基联(标准品)Cripto Antibody (Mouse Specific)氧化铟

2，二酚标准溶液(1.00mg/ml,基体：甲)Bim Antibody三氧化钼

2,6-二酚(标准品)Ring1A AntibodyBOC-L-亮氨酸

犬KI-67抗原(MKI67)ELISA试剂盒Neuropilin-2  神经纤毛蛋白-2100 ul

犬I 型胶原蛋白ELISA试剂盒NRSF/REST  神经元抑制蛋白100 ul

犬E选择素(SELE)ELISA试剂盒NSBP1  核小体结合蛋白120 ul

犬C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒NSE  神经元特异性醇化酶100 ul

犬C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒NT-3  神经营养因子-3100 ul

犬CD8分子(CD8)ELISA试剂盒NT-4/NT-5  神经生长因子4/520 ul

犬CD6分子(CD6)ELISA试剂盒MT-ND1  NADH复合体1100 ul

犬CD4分子(CD4)ELISA试剂盒NTCP  钠离子/牛磺胆酸共转运蛋白100 ul

犬CD31分子(CD31)ELISA试剂盒Neurturin  神经生长因子100 ul
鸭瘟病毒PCR检测试剂盒规格无精症缺失基因1抗体3,4-Secotirucalla-4(28),7,24-triene-3,26-dioic acid中文名：别名：分子式：C30H46O4

甲状腺素5'脱酶3抗体Glochidiol中文名：别名：20(29)-Lupene-1,3-diol分子式：C30H50O2

DNA聚合酶θ/DNA pol θ抗体Actein中文名：阿克特素别名：分子式：C37H56O11

磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白1抗体Erythrodiol 3-palmitate中文名：别名：分子式：C46H80O3

磷酸化形态发生紊乱关联激活因子1抗体Betulin palmitate中文名：别名：分子式：C46H80O3
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。