豌豆内源基因PCR检测试剂盒说明书

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
正庚烷(无水级,99%)CD3 (17A2) Rat mAb (APC Conjuga)噻唑

三十六烷(standard for GC,≥98.0%(GC))PHB1 Antibody基肼盐酸盐

三十六烷(分析标准品,≥99.0%(GC))PHB1 Antibody4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶盐酸盐

alpha-六六六标准溶液(100μg/ml,u=3%)EML4 Antibody2-甲基基

alpha-六六六标准溶液(10μg/ml,u=6%)Met (D1C2) XP® Rabbit mAb  (HRP Conjuga)双酮酰

alpha-六六六标准溶液(50μg/mL,分析标准品)Thioredoxin 1 (C63C6) Rabbit mAb溴吲哚-2-甲酸

正十六烷(Standard for GC,>99.5%(GC))NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAbN-叔丁基-5-溴-2-噻吩磺酰

正十六烷(分析标准品,≥99.5%(GC))NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAb基肼盐酸盐

正己(Standard for GC,>99.5%(GC))PPARγ (D69) Antibody1,2-环氧环戊

正己(分析标准品,>99.8%(GC))Phospho-Shc (Tyr317) Antibody1H-并咪唑-2-甲酸

十六(分析标准品,≥99.5%(GC))CD16 (D1N9L) Rabbit mAbDL-alpha-甘氨酸

正庚酸(Standard for GC)Shc Antibody溴

正庚酸(标准品)Calnexin Antibody2-甲基-3,5-二甲酸

1,6-己二(standard for GC)Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody2-溴-6-羟基吡啶

2-庚酮(分析标准品,≥99.8%(GC))Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody6-氟吲哚-甲

十七烷(分析标准品,≥99.5%(GC))PPARγ (C26H12) Rabbit mAb氨基-2--硝基吡啶

三十一烷(Standard for GC≥97.0%(GC))PPARγ (C26H12) Rabbit mAb甲氧基

二十六烷(分析标准品, ≥99.5% (GC))SCD1 (M38) Antibody叔丁基-吡唑-5-

HIV(1+2)抗原ELISA试剂盒phospho-CSF1R(Tyr923)  酸化巨噬细胞集落刺激因子受体20 ul

H5型病毒(H5N1)(IgG)ELISA试剂盒MCT1  单羧酸转运蛋白-11000 ul

G蛋白偶联受体152(GPR152/PGR5)ELISA试剂盒MCM2  微小染色体维持缺陷蛋白2200 ul

G蛋白偶联受体109A(GPR109A)ELISA试剂盒MCM3  微小染色体维持缺陷蛋白3100 ul

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)ELISA试剂盒MCM5  微小染色体维持缺陷蛋白5100 ul

G蛋白偶联雌激素受体1(GPR30)ELISA试剂盒MCM7  微小染色体维持缺陷蛋白7100 ul

G蛋白偶合受体44(GPR44/CRTH2/DL1R)ELISA试剂盒MCSF  巨噬细胞克隆刺激因子100 ul

GTP酶NRas(NRAS)ELISA试剂盒Mcl1  髓样细胞白血病-1100 ul

Gremlin-1蛋白(GREM1)ELISA试剂盒Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163)  酸化髓样细胞白血病-120 ul
豌豆内源基因PCR检测试剂盒说明书上皮钠离子通道蛋白γ抗体1-Acetyl-4-piperidinecarboxylic acid中文名：1-乙酰基-4-哌啶甲酸别名：分子式：C8H133

胚胎干细胞RAS蛋白抗体(S)-4-(4-Amibenzyl)-2(1H)-oxazolidine中文名：(s)-4-(4-氨基苄基)-1,3-噁唑烷-2-酮别名：分子式：C10H12N2O2

转录因子ETV7抗体2-Ami-3-Formylchromone中文名：2-氨基-3-甲酰基色原酮别名：分子式：C10H73

真核翻译延长因子2抗体2-Amidiphenylamine中文名：邻氨基二别名：分子式：C12H12N2

真核延伸因子激酶2抗体Acid Black 1中文名：酸性黑 1别名：分子式：C22H14N6Na2O9S2