蓝舌病毒PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
高藜芦酸(标准品)C37H42N2O6(S,S)-(+)-2,二甲氧基-1,双(二甲氨基)丁烷

PD0325901C31H46O5碳酸肼

西他塞坦钠/司他生坦钠C9H12O32,2'-双(2-)-4,4',5,5'-四基-1,2'-联咪唑[光聚合引发剂]

西他塞坦钠/司他生坦钠C21H20NO6.Cl5'--羟基-2'-甲基-2-萘

西他塞坦钠/司他生坦钠C27H34O12呋喃酮酸酯

轮环藤宁四酸/1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四酸C8H8O3(+)-二酰基-D-

拉米夫定C8H8O3磺酸酐

拉米夫定(标准品)C6H6O3Nα-[(9H-芴-9-氧基)羰基]-L-苏氨酸叔丁酯

盐酸三氟拉C11H10O4α-基肉桂酸酯

盐酸三氟拉(标准品)C11H14O41--2,5-二氧基

皮质甾酮/肾上腺酮C30H30O8甲酰基-β-氨酸

皮质甾酮(标准品)C42H70O122,6-二并噻唑

二硫化四基秋兰姆C10H8O33,5-二氟甲

双硫仑(标准品)C7H8O2基化镁

杨梅素/杨梅酮C11H10O3(R)-哌-2-羧酸

杨梅素/杨梅酮（标准品）C8H15NO2氨甲酰基-5-氟基酸

去氧胆酸C44H58O5酸镉

β-环糊精C30H46O3氨基-2,5-二酚

白介素1受体相关激酶1(IRAK1)ELISA试剂盒phospho-c-Jun/AP-1(Thr91+Thr93)  酸化原癌基因c-Jun500 ul

白介素1受体拮抗剂(IL1Ra/CD121)ELISA试剂盒phospho-c-Jun (Ser73)  酸化原癌基因c-Jun1 Pack

白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒phospho-c-Jun (Ser243)  酸化原癌基因c-Jun300 ul

白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒phospho-c-Jun (Thr93)  酸化原癌基因c-Jun300 units

白介素1β前体(pro-IL1B)ELISA试剂盒phospho-c-Jun (Ser63)  酸化原癌基因c-Jun1 Kit

白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒Jun B  活化蛋白激酶B100 ul

白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒Jun D  活化蛋白激酶D100 ul

白介素18结合蛋白(IL-18BP)ELISA试剂盒CK I alpha/STK  属丝/苏氨酸蛋白质激酶100 ul

白介素18(IL-18)ELISA试剂盒CK II Alpha/STK  属丝/苏氨酸蛋白质激酶100 ul
蓝舌病毒PCR检测试剂盒说明书补体C4a+C4b蛋白抗体Ginseside F1中文名：人参皂苷F1别名：分子式：C36H62O9

少突胶质细胞跨膜蛋白抗体Ginseside F2中文名：人参皂苷F2别名：分子式：C42H72O13

6号染色体开放阅读框140抗体Ginseside Rb2中文名：人参皂苷Rb2别名：分子式：C53H90O22

L型钙通道蛋白抗体Ginseside CK中文名：人参皂苷CK别名：分子式：C36H62O8

电压依赖性钙通道Cav3.1抗体Lucidadiol中文名：别名：分子式：C30H48O3
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。