卡氏肺孢子虫PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
帕唑帕尼盐酸盐C16H10N2O25-溴-1-戊

噻托溴铵C10H8O42-甲基-5-羟基嘧啶

富马酸福莫特罗 (二水）C20H20O72,5-二甲氧

富马酸福莫特罗(无水)C17H27,5-二-2,二

法罗培南(钠)(2.5水)C25H22O10双氢噻

法罗培南钠(标准品)C23H26N2O4四氢化邻二甲酸酐

苄基肼C20H26O46-氟烟酸甲酯

苄基肼(标准品)C46H56N4O82--甲氧基甲酸

氟/PMSFC13H16O5羧基-氟酸

奥利司他C16H20O6-磺酰基甲酸

利福霉素钠；利福霉素SV钠C25H41,2-二酸

醋酸奥曲肽C9H10O22,二溴酸酯

S(+)-2-氨基-1-丁C20H30O21,二甲基金刚烷

D-鞘氨C17H17NO42-溴-5-甲氧基溴苄

糖脂;植物鞘C18H19NO5胡椒

甲磺丁脲C22H26O8溴-2-磺

甲磺丁脲(标准品)C37H42Cl2N2O5果糖二酮

奥美拉唑 C44H70O16N-十八烷基甲酰

肥大/干细胞生长因子受体(试剂盒/Sl/CD117)ELISA试剂盒CD44v10  CD44V10100 ul

芳香酶ELISA试剂盒CD45/B220  白细胞共同抗原300 ul

二酰基甘油(DAG/DG)ELISA试剂盒CD45  CD45100 ul

二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒CD46/MCP  膜辅蛋白100 ul

二氧化酶(DAO)ELISA试剂盒CD46/MCP  膜辅蛋白100 ul

儿茶酚抑素ELISA试剂盒CD45RO  CD45RO抗100 ul

多萜长二酸寡糖蛋白环糊精糖基转移酶(DDOST/OST-48)ELISA试剂盒CD48/SLAMF2  CD48100 ul

多肽YY(PYY)ELISA试剂盒CD58/LFA-3  淋巴细胞功能相关抗原-3100 ul

多巴D1受体(D1R)ELISA试剂盒Ingrin alpha 2/CD49b  整合素α21 Kit
卡氏肺孢子虫PCR检测试剂盒说明书人组织蛋白酶抗体(Cath Ab)ELISA试剂盒英文名称：Human Cathepsin Antibodies,Cath Ab ELISA Kit进口/原装

人组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒英文名称：Human Histone Deacetylase,HD ELISA Kit 进口/分装

人组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒英文名称：Human Tissue Polypeptide Antigen，TPA ELISA Kit进口/原装

人组织相容性2-K1-K 区(H2-K1)ELISA试剂盒英文名称：human Histocompatibility 2-K1-K region，H2-K1 ELISA Kit进口/分装

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒英文名称：Human Tissue-type Plasimigen Actilyse，t-PA ELISA Kit进口/原装

人组织因子(TF)ELISA试剂盒英文名称：Human Tissue factor，IF ELISA Kit*小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒      组装/原装

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小鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒      组装/原装