军团杆菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
索拉非尼C22H28N2O4辛酸酯

二酸组；酸组C17H24O52-氨基-5-溴-羟基嘧啶

酸喹,喹二酸盐C19H26O72,6-二甲

(-)-莨菪,L-天仙子，L-天仙子C20H24O72H-2-酸 -1,2,三氮唑

(-)-莨菪,L-天仙子，澳洲毒茄(标准品)C20H18O10对甲氧基

葡聚糖D70/右旋糖苷C7H7NO2并噻唑-2-

右旋糖苷/葡聚糖D40C44H64O242-基-

葡聚糖D20/右旋糖苷C22H33NO25-溴-1-甲基-1,2,噻唑

沙格列汀/沙克列汀盐酸盐C24H39NO62-氟-5-吡啶酸

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG95%）C46H58N4O92--甲基-5-溴吡啶

达沙替尼一水合物C7H6O4L-甲氧基扁桃酸

依西美坦C8H8O21,2-二

依西美坦(标准品)C7H6O31-氨基-2-甲基-2-

氨基比林C5H4O3基香兰素缩

马来酸那敏/扑尔敏C40H56O2间异酸酯

马来酸那敏/扑尔敏(标准品)C36H36N2O8N-甲基-甲氧基苄

血管紧张素IIC21H20O10-三氟

维生素 D3 ((胆骨化)C34H30O15-2-溴甲

分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒CD9/MRP-1  CD9蛋白100 ul

分泌型脂酶A2(sPLA2)ELISA试剂盒CD40L  CD40L100 ul

肺炎支原体(MP)(IgG)ELISA试剂盒Ingrin alpha 2b/CD41  血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa100 ul

肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒CD43/SPN  CD431 Kit

肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA试剂盒CD44/PGP1  CD44100 ul

肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA试剂盒CD44v4  CD44V4100 ul

肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒CD44v5  CD44V5100 ul

肺表面活性蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒CD44v6  CD44V6100 ul

肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA试剂盒CD44v7  CD44V71 Kit
军团杆菌PCR检测试剂盒规格肿瘤/抗原家族4亚型7抗体Cynaside F中文名：别名：分子式：C41H62O15

神经细胞膜糖蛋白M6bPeriplocoside F中文名：别名：Periploside F分子式：C63H104O23

FK506结合蛋白相关蛋白抗体（他克莫司相关蛋白）7α-Methoxy-5α,6α-epoxyergosta-8(14),22-dien-3β-ol中文名：别名：5α,6α-Epoxy-7α-methoxyergosta-8(14),22-dien-3β-ol分子式：C29H46O3

G蛋白偶联受体激酶5抗体Minisecolide C中文名：别名：分子式：C28H34O7

磷酸化糖原合酶激酶-3α抗体Withaphysalin A中文名：别名：分子式：C28H34O6
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。