伯氏疏螺旋体PCR检测试剂盒厂家

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
Sodium oxalate苄基苯基硫 98%FMOC-D-炔基甘氨酸 96%

Sodium sulfide3-溴硫代苯甲 98%Fmoc-D-烯基甘氨酸 96%

Sodium aluminate2-溴茴香硫 98%FMOC-D-3-(4-吡啶基)-氨酸 98%

Sodium antimonate4-溴茴香硫 98%FMOC-L-3-(3-吡啶基)-氨酸 98%

Sodium bismuthate3-溴甲基-5-氯苯并噻吩 98%FMOC-L-3-(2-吡啶基)-氨酸 97%

Sodium carbonate decahydrate5-溴噻吩-2-甲 97%FMOC-D-3-(2-吡啶基)-氨酸 98%

Sodium chromate5-溴苯并[b]噻吩 98%FMOC-L-4-氨酸 98%

Sodium chromate tetrahydrate2-溴 99%FMOC-D-4-氨酸 98%

Sodium fluoroaluminate4-溴正苯 99%FMOC-L-3-氨酸 98%

Sodium fluoroborate2-溴-4-氯苯甲 98%FMOC-D-3-氨酸 98%

Sodium hexametaphoshpate3-溴苯甲酰氯 98%FMOC-L-2-氨酸 97%

Sodium polyphosphate3-溴乙基苯 98%FMOC-D-2-氨酸 98%

Sodium hypophosphite4-溴乙基苯 99%FMOC-L-4-溴苯氨酸 98%

Sodium metaborate tetrahydrate4-甲氧基-α－溴代苯乙酮 98%FMOC-L-2-溴苯氨酸 98%

Sodium metaphosphate3-溴噻吩 97%FMOC-L-3,4-二氯苯氨酸 96%

Trisodium trimetaphosphate2-溴-3-甲基噻吩 99%FMOC-D-3,4-二氯苯氨酸 96%

1,2,3,5-四氯苯(标准品)Phospho-Myosin Light Chain 2 (Thr18/Ser19) AntibodyLRRC4B/NGL3  神经突触蛋白NGL3抗体

氟苯脲(分析标准品,98%(HPLC))Phospho-Myosin Light Chain 2 (Ser19) Mouse mAbLRRC41  LRRC41蛋白抗体

氟苯脲(分析标准品,99%(HPLC))Phospho-Myosin Light Chain 2 (Ser19) Mouse mAbLRRC4  脑瘤相关基因抗体

1,2,3-三氯苯(分析标准品,>99.8%（GC))Acetyl-CoA Carboxylase (C83B10) Rabbit mAbLRRC2  LRRC2蛋白抗体

1,2,4,5-四氯苯标准溶液(0.104mg/ml,基体:异辛烷)Acetyl-CoA Carboxylase (C83B10) Rabbit mAbLRRC15  富含亮氨酸重复蛋白15抗体

标准溶液(202mg/L,基体:甲)PhosphoPlus® RIP (Ser166) Antibody DuetLRRC10  富含亮氨酸重复蛋白10抗体

标准溶液(100μg/ml,u=4%)Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAbLRPAP1/MRAP  脂蛋白受体相关蛋白抗体（低密度脂蛋白相关蛋白的相关蛋白1）

标准溶液(10μg/ml,u=7%)MSK2 (D41A4) XP® Rabbit mAbLRP6  低密度脂蛋白受体相关蛋白6抗体

三唑磷(分析标准品,>97%(HPLC))Histone H3 (96C10) Mouse mAb (IHC Formulated)LRP5  低密度脂蛋白受体相关蛋白5抗体

虫酰肼(分析标准品,99%)MST1 AntibodyLrp2/Megalin  糖蛋白gp330抗体
伯氏疏螺旋体PCR检测试剂盒厂家埃兹蛋白抗体Acetophene tosylhydrazone中文名：苯乙酮对甲苯磺酰基腙别名：分子式：C15H16N2O2S

转录因子E2F-4抗体2-Ami-4-chlorobenzothiazole中文名：2-氨基-4-氯苯并噻唑别名：分子式：C7H5ClN2S

细胞转录因子ELK1抗体Allyl phexyacetate中文名：苯氧乙酸烯丙酯别名：分子式：C11H12O3

内皮素-1单克隆抗体2-Allylphel中文名：2-烯丙基酚别名：分子式：C9H10O

肠道病毒71型抗体2-Ami-2'-chloro-5-nitro benzophene中文名：2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮别名：分子式：C13H9ClN2O3