鼻疽假单胞菌PCR检测试剂盒厂家

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
BDO2,5-二氯苯甲 98%酸钠 分析标准品

2,3-Butanediol2,6-二氯苯磺酰氯 97%酸钠 99%

BT4-(三氟甲基)苄溴 98%酸钠 用于昆虫细胞培养, ≥99.0%

NPG对溴苯酚 98%对苯醌 97%

DPG溴代异丁烷 98%苯亚磺酸钠 98%

Dodecal溴烷 99%对甲苯亚磺酸钠 98%，无物

1,2,6-Hexanetriol2,4-二氯苯酚   CP,98%对甲苯亚磺酸钠 98%，合物

1-Hexal2,6-二氯苯酚 AR,99.0%三氟磺酸 98%

PPG2,4,6-三溴苯酚 98%三氟磺酸 99%

Glutaraldehyde2,4,6-三氯苯酚 98%三氟磺酸酐 98%

Paraformaldehyde四氢吡喃酮 97%三氟磺酸镱合物 99.9% metals basis

TCADL(±)-3-氨基-3-苯基酸 98%硫酸氧钛 synthesis grade

Benzaldehyde2-丁炔酸 98%硫酸氧钛 93%

OCBA2-丁炔酸乙酯 98%十六胺 90%

Citral针头式过滤器 孔径:0.22μm 直径：13.0mm 800个/箱,100个/每包油胺 C18：80-90%

2,4-DCAD苯甲酰甲酸 98%溴化亚铜 AR,99.0%

2,6-二硝苯(分析标准品,用于环境分析)BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAbMAdCAM-1  粘膜血管定居因子抗体

1,4-二(分析标准品,用于环境分析,>99.9%（GC))BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAbMAdCAM1  粘膜细胞粘附分子1抗体

4,4'-二氨基二苯硫(标准品)SATB1 (P472) AntibodyMad2L2  有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白2抗体

二甲氧烷(分析标准品,≥99.8%(GC))TET2 (D6C7K) Rabbit mAb (Mouse Specific)Mad2L1  有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1抗体

位十二内酯(分析标准品,≥98.5%(GC))CDC73 (A264) AntibodyMAD2  有丝分裂阻滞缺陷蛋白2抗体

精噁唑禾草灵(标准品)CDC73 (D410) AntibodyMAD1  Mad1抗体

6-羟基烟酸(分析标准品,≥98.0%(HPLC))SATB1 (L745) AntibodyMACC1  结肠癌转移相关蛋白1抗体

正庚(分析标准品,99.8%（GC))cdc25A AntibodyM2-PK/PKM2  小鼠抗酮酸激酶-M2抗体

1-己烯(分析标准品,≥99.5%(GC))Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Sepharose® Bead Conjugate)M2-PK/PKM2  酮酸激酶-M2抗体

正己烷(分析标准品,>99.5%（GC))GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)M2-PK (pyruvate Kinase M2)  酮酸激酶-M2
鼻疽假单胞菌PCR检测试剂盒厂家免疫调节蛋白AIRE抗体Simenine中文名：青藤碱别名：分子式：C19H234

磷酸化蛋白激酶AKT1抗体5-Methoxycanthin-6-one中文名：5-甲氧基铁屎米酮别名：分子式：C15H10N2O2

乙醛脱氢酶2型抗体Browniine中文名：别名：Salt form分子式：C25H427

γ-氨基丁酸醛脱氢酶抗体Glabratine中文名：别名：分子式：C27H34N2O9

衰老相关蛋白5抗体Isoboldine中文名：异波尔定碱别名：分子式：C19H214