鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒厂家

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Sodium acetate -Acetic acid Buffer solutionMBHA Resin 0.3~0.8mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB齐墩果酸 分析标准品，>98%

Barbitone sodium-Hydrochloric acid Buffer solutionMalantide ≥97% (HPLC)齐墩果酸 97%

Borax-Hydrochloric acid Buffer solutionMastoparan-7 ≥97% (HPLC)麦冬皂苷D 分析标准品，>98%

Potassium chloride-Hydrochloric acid Buffer solutionMastoparan 17 ≥96.5%补骨脂素  分析标准品，≥98%

Sodium citrate-Hydrochloric acid Buffer solutionDL-正亮氨酸 98%芍药苷  ≥98% (HPLC)

Saturated picric acid Buffer solutionL-正缬氨酸 99%3,4-二羟基苯甲酸 分析标准品, ≥97.0% (HPLC)

Xmol/L-Hydrochloric acid Buffer solutionN'-硝基-L-精氨酸 98%紫杉 98%

L-Oxalate Buffer solutionN-硝基-L-精氨酸甲酯 98%胡椒碱 分析标准品，>98%

Hank′s solutionL-正亮氨酸 99%植酸 90%,用于分子生物学

任氏液3-硝基-L-酪氨酸 98%植酸 分析标准品

卢戈液神经降压素  ≥95% (HPLC)虎杖苷 分析标准品

TCEPBoc-D-精氨酸盐酸盐 BR虎杖苷 98%

Folin & Ciocalteu’s phel reagentFmoc-1-Nal-Wang resin 100-200mesh,Substitution 0.3-0.8mmol/g贝母素乙 分析标准品，>98%

GlycerineFmoc-2-Nal-Wang resin 100-200mesh,Substitution 0.3-0.8mmol/g盐酸巴马汀 分析标准品

1-ThioglycerolN-α-羰基苯氧基-D-精氨酸 98.0%人参三 分析标准品，≥98

Disodium beta-glycerol phosphate pentahydrateN'-硝基-D-精氨酸 98%原阿片碱   98%

乙酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAbMetallothionein 3  金属硫蛋白3抗体

己酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC))AUP1 (D5M9Q) Rabbit mAbMetallothionein  金属硫蛋白抗体

棕榈酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))Asymmetric-Methyl-PABP1 (Arg455/Arg460) (C60A10) Rabbit mAbMetal ion transporter  拟南介金属离子转运蛋白抗体

异辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-NDRG1 (Ser330) AntibodyMet Enkephalin  甲硫氨酸脑啡肽抗体

乙胺(Standard for GC,>99.5%(GC))Sav1 AntibodyMESP1  心血管发育中胚层相关蛋白1抗体

乙二二乙(standard for GC,≥99.5%(GC))Brg1 (A52) AntibodyMesothelioma  间质细胞蛋白抗体

乙二二甲(standard for GC,≥99.5%(GC),含0.01% BHT稳定剂)Brg1 (A52) AntibodyMesothelin  间皮素抗体

乙二乙乙酸酯(Standard for GC,>99%(GC))Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjugate)MEPE  细胞外基质磷酸化抗体

戊酸乙酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Connexin 43 (Ser368) AntibodyMEP1A/Meprin alpha/PPHA  苯甲酸肽解酶抗体

乙酸乙酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Connexin 43 AntibodyMEOX 2  间充质同源盒蛋白2抗体
鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒厂家内皮素受体A抗体3H-1,2-Benzodithiol-3-one-1,1-dioxide中文名：3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮-1,1-二氧化物别名：分子式：C7H4O3S2

内皮细胞受体蛋白酪氨酸激酶A抗体（肿瘤坏死因子α诱导蛋白4）5-Azacytidine中文名：5-氮胞苷别名：分子式：C8H12N4O5

酪氨酸蛋白激酶A4抗体Bathophenanthroline中文名：红菲绕啉别名：分子式：C24H16N2

大肠埃希菌菌体蛋白抗体4'-Ami-3',5'-dichloroacetophene中文名：3',5'-二氯-4'-氨基苯乙酮别名：分子式：C8H7Cl2

前列腺素E受体3抗体2-Ami-6-chloropurine中文名：2-氨基-6-氯嘌呤别名：分子式：C5H4ClN5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。