耶尔森菌通用PCR检测试剂盒价格

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
α-Ketoglutaric acidD-苯氨酸 98%獐牙菜苦甙  分析标准品,≥98%

α-Ketoglutaric acid disodium saltD-2-苯甘氨酸 99%七叶皂苷钠 分析标准品，≥98%

OPDL?(+)-α-苯甘氨酸 98%槐角苷 分析标准品，98%

OPD-HC1L-苯氨 98%槐果碱  分析标准品，≥98%

IAMD-脯氨酸 99%菝葜皂苷元 分析标准品，≥98%

Putrescine dihydrochlorideCBZ-L-焦谷氨酸 98%五味子甲素 分析标准品，>98%

FormamideN-苯基甘氨酸 97%紫草素  分析标准品，≥97%

Formamide DeionizedL-苯氨酸苄酯盐酸盐 98%绞股蓝皂苷 分析标准品，UV≥98%

DMFAL-脯氨酸苄酯盐酸盐 98%五味子乙素 分析标准品，>98%

Spermine3-哌啶甲酸 98%五味子甲 分析标准品，>98%

Spermine tetrahydrochlorideL-3-(4-吡啶基)-氨酸 98%延胡索乙素 97%

SpermidineBoc-3-(4-吡啶基)-L-氨酸 97%3,3’-二没食子酸酯茶黄素 分析标准品, ≥98.0% (HPLC)

Spermidine trihydrochlorideFmoc-3-(4-吡啶基)-L-氨酸 97%盐酸拓扑替康 分析标准品，≥99%(HPLC)

CDCFMOC-脯氨  98%单宁酸 AR

DCCIZ-L-脯氨 97%丹参酮IIA  98%

DIPCDIH-Phe-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8mmol/g,100~200mesh 1% DVB雷公藤乙素  分析标准品，≥98%

吡啶(Standard for GC,>99.9%(GC))GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAbMEF2A  肌细胞增强因子2抗体

噻吩(Standard for GC,>99.5%)GATA-1 (D52H6) XP® Rabbit mAbMeCP2  甲基化CpG结合蛋白2抗体

四乙二二甲(standard for GC,≥99.5%(GC))eS (D8A6N) Rabbit mAbMeasles virus fusion protein  麻疹病毒融合蛋白抗体

蒽(分析标准品,≥99.7%)β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjugate)ME1  胞浆苹果酸酶1抗体

茴香(分析标准品,>99%(GC))CD7 AntibodyMDR1/p-GP/CD243 (N-terminus)  多药耐药蛋白/P-糖蛋白抗体

三氯叔丁(标准品)CD27 (O323) Mouse mAb (FITC Conjugate)MDR1/p-GP/CD243 (C-terminus)  多药耐药蛋白/P-糖蛋白抗体(C端)

间甲酚(标准品)Phospho-Btk (Ser180) (3D3) Mouse mAbMDMX  MDM2样P53蛋白结合抗体

苯并(b)荧蒽标准溶液(5μg/mL,基体：甲)GLI1 (C68H3) Rabbit mAbMDM2  双微体2癌基因抗体

苯并(k)荧蒽标准溶液(4.38ug/ml,基体:甲)GLI1 (C68H3) Rabbit mAbMDH1  可溶性苹果酸脱氢酶抗体

4-溴-3-氯苯胺(标准品)Rab11 AntibodyMDGA2  神经元膜糖蛋白锚定蛋白2抗体
耶尔森菌通用PCR检测试剂盒价格周期素样Y1抗体Jinflexin D中文名：别名：分子式：C36H32O3

周期素J抗体Giffonin P中文名：别名：分子式：C19H22O7

周期素L抗体Dihydroxyalnusone中文名：别名：分子式：C19H18O5

补体C1RL链多肽抗体Phoyunnanin E中文名：别名：分子式：C30H26O6

周期素M2抗体4a-Demethoxysampsone B中文名：别名：分子式：C15H16O6