河流弧菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Methyl Red mixed indicator powderFmoc-Cys(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB,0.3-0.8mmol/g草胺标准溶液10μg/ml,u=2%,溶剂:甲

Methylene greenN-CBZ-D-天冬氨酸 98%残杀威 分析标准品，99.5%

Methyl GreenN-苄氧羰基-O-叔丁基-L-丝氨酸 98%残杀威标准溶液 100μg/ml,u=2%

Januˊs green BCBZ-D-缬氨酸 98%残杀威标准溶液 10μg/ml,u=4%

Resazurin sodium saltL-半胱氨酸(Trt)-NH2   98%草甘膦 分析标准品，99.5%

Azure IIN'-(2-氯苄氧羰基)-L-鸟氨酸  98%草甘膦标准溶液100μg/ml,u=2%,溶剂:

Azure B2-氯-D-苯氨酸 98%草甘膦标准溶液10μg/ml,u=2%,溶剂:

Azure II eosin3-氯-D-苯氨酸 99%哒螨灵 分析标准品，99%

Orange G63-氯-L-苯氨酸 98%多效唑 分析标准品,>99%(HPLC)

Orange IV4-氯-D-苯氨酸甲酯盐酸盐 99%多效唑标准溶液100μg/ml,u=2%,溶剂:甲

Orange Ⅱ4-氯-DL-苯氨酸甲酯盐酸盐 98.5%多效唑标准溶液10μg/ml,u=2%,溶剂:甲

Orange ⅠN-苄氧羰基-D-苯氨  97%二甲戊乐灵 分析标准品，99%

Auramine OL-胱氨酸二甲酯  97%二甲戊乐灵标准溶液100μg/ml,u=2%,溶剂:酮

Besmarck brown Y2-Chlorotrityl Chloride Resin 0.8-1.5mmol/g, 100~200 mesh二甲戊乐灵标准溶液10μg/ml,u=2%,溶剂:酮

Acridine orangeCalcitonin Gene Related Peptide Fragment 8-37 human猛杀威 分析标准品，98.5%

AcriflavineCalcitonin Gene Related Peptide rat ≥97% (HPLC)咪鲜胺 分析标准品，95.5%

高岭土(CP)Phospho-Jak1 (Tyr1034/1035) AntibodyMouse Anti-human IgM/Cy5.5  Cy5.5标记的小鼠抗人IgM

超细高岭土(325(44um))Jak1 AntibodyMouse Anti-human IgM/Cy5  Cy5标记的小鼠抗人IgM

超细高岭土(1250(11um))ALK (C26G7) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Cy3  Cy3标记的小鼠抗人IgM

超细高岭土(3000(5um))RasGRP3 (C33A3) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Bio  生物素标记的小鼠抗人IgM

超细高岭土(6000(3.5um))Granzyme B (D2H2F) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Mouse Anti-human IgM/APC  APC标记的小鼠抗人IgM

高岭土(医药级)ApoA5 (2G1H11) Mouse mAbMouse Anti-human IgM/AP  碱性磷酸酶（AP）标记的小鼠抗人IgM

硅藻土G(TLC)SMARCE1/BAF57 (E6H5J) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的小鼠抗人IgM

硅胶(AR)S5a/PSMD4 (D17E4) Rabbit mAbMouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgM

二氧化硅(99.99%,1-3mm)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (APC Conjugate)Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的小鼠抗人IgM

石英砂(AR,6-10目或2-3mm)NME1/NDKA (G19) AntibodyMouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的小鼠抗人IgM
河流弧菌PCR检测试剂盒规格绵羊肺成纤维细胞，OAR-L1细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人 SV40 转染成骨细胞，HFOB1.19细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人B淋巴细胞瘤细胞，RAMOS细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人T淋巴瘤细胞，H9细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人T淋巴细胞白血病细胞，Jurkat，Clone E6-1细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人膀胱癌细胞，EJ细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。