尤氏泰勒虫PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
BOC-L-Homophenylalanine2,2′-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺盐 98%2-羟基-4-甲基吡啶 98%

BOC-D-Homophenylalanine腺苷-5′-三磷酸二钠盐，三 98%4-氨基苯甲酸甲酯 98.0%

Sodium Glycinate放线菌素D 98%（）2,4,6-三氯苯酚 98%

L-Prolil牛血清白蛋白 96%碱式乙酸铝 AR

Creatine牛血清白蛋白标准溶液 0.5 mg/ml 标准溶液碱式乙酸铝 CP

N-Acetyl-L-Valine考马斯亮蓝G250 AR，无蛋白酶四乙酸铅 AR,90%

N-Acetyl-DL-tryp tophane二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基) 99%磷酸 99.9%，8000目

N-Acetyl-glycine聚氧乙烯20油 average Mn ~1,150磷酸 99%

D-Tryptophan methyl ester hydrochloride聚氧乙烯月桂 高纯级，Brij-351,2-二(二甲硅基)苯 98%

L-Cysteine methyl ester hydrochloride聚氧乙烯月桂 高纯级，Brij-301，4-二（二甲基硅烷基）苯 97%

D-Phenylalanine methyl ester hydrochloride二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基) 细胞与昆虫细胞培养级, ≥98%1，4-二（*基硅烷基）苯 96%

L-Alanine methyl ester hydrochloride乌苯美司 超纯级，>99%苄基*基氢氧化铵 40%甲溶液

D-Alanine Methyl Ester Hydrochlorideγ-环糊精 98%,用于细胞培养1,4-二苯基丁二炔 99%

D-Proline methyl ester hydrochlorideγ-环糊精 98%碱式碳酸镁 CP

L-Tyrosine methyl ester hydrochloride胞嘧啶 98%乙烯基-POSS 99%

D-Tyrosine Methyl ester hydrochloride醋酸纤维素 TLC、柱层析苯基-POSS 98.5%

2，4-滴酸(标准品)SCD1 (C12H5) Rabbit mAbPAP2B  磷脂酸磷酸酶2b抗体

2，4-滴酸(98%)AMPKα1 AntibodyPAP1/Acid Phosphatase  酸性磷酸酶抗体

二噻农(标准品)AMPKα1 AntibodyPan-ras  Pan ras抗体

棉隆(标准品)Lyn (C13F9) Rabbit mAbPANK4  泛酸激酶4抗体

双氯酚(标准品)Lyn (C13F9) Rabbit mAbPANK3  泛酸激酶3抗体

异净(标准品)ERp72 AntibodyPANK2  泛酸激酶2抗体

异菌脲标准溶液(100μg/ml,u=4%)Claspin AntibodyPANK1  泛酸激酶1抗体

异氯磷(标准品)PRSS15/LONP1 (D8W1J) Rabbit mAbPancreatic Lipase  胰脂肪酶抗体

1,4-二氯苯-d4(标准品)Survivin (6E4) Mouse mAbPancreatic Amylase  胰淀粉酶抗体

2,2,3,3,4,4,5,56,6-十溴代-1,1-联苯(标准品)Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (PE Conjugate)pan methyl Lysine  泛甲基赖氨酸抗体
尤氏泰勒虫PCR检测试剂盒说明书Glycine sodium,98%通用试剂　25G

Sodium oleate,≥99%通用试剂　250MG

Sodium amide,95%通用试剂　25G

Sodium hydrogen difluoride,98%通用试剂　250G

4-Amibenzoic acid sodium salt,≥99%通用试剂　25G

Sodium dodecylbenzenesulfonate通用试剂　100G

Sodium stearate,≥99%通用试剂　1G

Sodium phelate,99%通用试剂　5G

Sodium benzenesulfonate,97%通用试剂　25G

Sodium salicylate,≥99.5%通用试剂　100G

Sodium malonate,≥97.0%通用试剂　25G

Sodium propionate,≥99.0%通用试剂　250G

Sodium oxalate,≥99%通用试剂　100G

Sodium hexafluoroaluminate通用试剂　100G

Sodium fluorosilicate通用试剂　100G