小泰勒虫PCR检测试剂盒规格

​
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
L-Dopa百里香酚蓝 IND双(1,5-环辛二烯)-三氟甲磺酸铑 98%

T4百里香酚蓝 ACS reagent, 95 %氯钯酸 Pd 26.2%

L-thyroxine sodium邻联甲苯胺 AR，98%氯化钯  Pd 59-60%

L(-)-Epinephrine1,2,4-三氯苯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)钯碳 5%Pd

L-radrenaline百里香酚酞 AR钯碳 10%Pd

PTH1-84百里香酚酞 indicator十二羰基三钌 99%

PTH1-34百里香酚兰钠 AR三(二亚苄- base酮)二钯(0)  97%

S-Carboxymethyl-L-Cysteine1,1,1-三氯乙烷 包含0.05%C4H8O2稳定剂,standard for GC,≥99.5%避蚊胺 99%

N-Acetyl-L-Glutamine二十四烷 AR对甲 ≥97%,Kosher

Glycyl-L-Tryosine二十四烷 分析标准品, ≥99.5% (GC)对甲酸甲酯 99%

Creatine Mohydrate二十四烷 99%间甲酰氯 99%

Creatinine盐酸邻联甲苯胺 AR邻甲苯甲酸 98%

3,5-Diiodo-L-thyronine钨 99.99% metals basis2-甲酰氯 98%

N-(r-L-Glutamyl)-1-naphthylamide1,1,2-三氯乙烷 standard for GC, ≥99.8% (GC)乙二 CP,97%

L-Leucyl-2-naphthylamide hydrochloride四甲氧基硅烷 98%乙二溶液  40 wt. % in H2O (8.8 M)

Z-ONSu硅钨酸 AR乙二溶液   用于分子生物学，40% in H2O (8.8 M)

草酸二乙酯(标准品)Bax AntibodyPAX2  配对盒基因2抗体

二(标准品)Bax AntibodyPAX1  配对盒基因1抗体

1,2-二(标准品)Huntingtin AntibodyPATZ1  转录调节因子MAZR抗体

邻苯二甲酸二异壬酯(标准品)Bax AntibodyPatched/PTCH  Patched/PTCH抗体

4,4-二溴联苯(标准品)LC3B AntibodyPASK/STK39  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶39抗体

1,1-二氯乙烯标准溶液(1mg/ml,基体：甲)Phospho-PEA-15 (Ser104) AntibodyPAS1C1  核纤层蛋白A相关结构蛋白1抗体

2，4-二肼(AR,≥99.0% (HPLC))Phospho-PEA-15 (Ser104) AntibodyParvalbumin  细小清蛋白抗体

2，4-二肼(~0.005 M in ethal,for TLC)SH2D1A AntibodyPARP4  多腺苷二磷酸多聚酶4抗体/多聚ADP-核糖聚合酶4

十二(标准品)SOCS2 AntibodyPARP3  多腺苷二磷酸多聚酶3抗体/多聚ADP-核糖聚合酶3

二乙胺（DEA）(标准品)SOCS2 AntibodyPARP16  多腺苷二磷酸多聚酶16抗体
小泰勒虫PCR检测试剂盒规格Benzyltriphenylphosphonium bromide,96%表面活性剂　10G

n-Propyltriphenylphosphonium bromide ...表面活性剂　50G

Methyltriphenylphosphonium chloride,97%表面活性剂　5G

Tetraphenylphosphonium bromide ,97%表面活性剂　10G

P,P-Dichlorophenylphosphine ,97%表面活性剂　25G

Ethoxycarbonylmethyl(triphenyl)phospho...表面活性剂　25G

(Carbethoxyethylidene)triphenylphospho...表面活性剂　5G

Ethylacetate,99.8%通用试剂　100ML

Methyl acetate,≥98%通用试剂　100G

Butyl acetate,≥99%通用试剂　100ML

Tributyl phosphate,≥99.0%通用试剂　100ML

Ethyl benzoate,≥99%通用试剂　100G

Methyl formate,99%通用试剂　100ML

Ethyl formate,97%通用试剂　100ML

Isopropyl formate,98%通用试剂　50G