塔那痘病毒PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
p-Menth-8-ene-1,2-diol2-（5-溴-2-吡啶偶氮）-5-（二乙氨基）苯酚 98%碲化铅 99.99%

p-Menthane-1,2,8-triol戊酸丁酯 ≥98.0 %L-谷氨酰胺 99%

p-Menthane-1,3,8-triol苯 光谱级, ≥99.7%透明质酸钠 95%，来源：鸡冠

Rehmapicroside5-[(5-溴-2-吡啶)偶氮]-2，4-二氨苯 AR甲基嘧啶磷 0.100mg/ml

Rosiridin邻甲酚酞 AR,碱溶甲基嘧啶磷 100μg/ml,u=2%

Terpineol邻甲酚酞 AR,溶甲基嘧啶磷 10μg/ml,u=3%

Furomollugin偶氮氯膦Ⅰ AR,显色剂鹰嘴豆芽素A 98%

1,5-Dicaffeoylquinic acid铬天青S AR隐丹参酮 分析标准品，≥98%

1,2,3,4,6-O-Pentagalloylglucose铬天青S IND金雀花碱 98%

1,2,3,6-Tetragalloylglucose铬天青S ≥96%(HPLC)薯蓣皂素 90%

1,2-Benzenediol环己烷 for HPLC, ≥99.9%黄豆苷原 98%

1-(4-Hydroxy-2-methoxyphenyl)-3-(4-hydroxy-3-prenylphenyl)propane磷酸三钙 AR, ≥96.0%刺芒柄花素 分析标准品，≥98%

1,5-Bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)penta-1,4-diene钙镁试剂 Indicator章胺盐酸盐 98%

1,7-Bis(4-hydroxyphenyl)hept-1-en-3-one间甲酚  Standard for GC,≥99.7%(GC)吴茱萸次碱 分析标准品，≥98%

1,7-Bis(4-hydroxyphenyl)hept-6-en-3-ol变色酸 AR虎杖甙  分析标准品，≥98%

1,7-Diphenyl-4-hepten-3-one环戊酮 GCS,≥99.5% (GC)虎杖甙  97%

威标准溶液（0.100mg/ml）CK2α AntibodyPERK  蛋白激酶样内质网激酶抗体

剂标准溶液（100μg/ml,溶剂：甲）Lck (L22B1) Mouse mAbperipherin  外周蛋白抗体

苯胺标准溶液（100mg/L,溶剂：）CD3 (17A2) Rat mAb (redFluor™ 710 Conjugate)Periostin  成骨细胞特异性因子2抗体

苯胺标准溶液（1000μg/ml,溶剂：甲）Emerin (L12) AntibodyPerilipin A+B  脂滴包被蛋白A+B抗体

苯胺标准溶液（0.989 mg/ml,基体：甲）Phospho-Chk2 (Thr68) AntibodyPerilipin A  脂滴包被蛋白Perilipin-A抗体

氨标准溶液（1000μg/ml,溶剂:）Phospho-Chk2 (Thr68) AntibodyPER2/Period circadian protein 2  节律蛋白2抗体

酰嘧磺隆（标准品）Phospho-Chk2 (Thr68) AntibodyPER1 protein  节律抑制蛋白PER1抗体

莠灭净（标准品）Chk2 AntibodyPeptide YY/PYY  酪酪肽抗体

草毒死（标准品）Chk2 AntibodyPEPT2/SLC15A2  肠道肽转运蛋白2抗体

正十六烷标准溶液（1000μg/ml,基体：甲）GABARAPL1 (D5R9Y) XP® Rabbit mAbPEPT1  肠道肽转运蛋白1/小肽转运蛋白1抗体
塔那痘病毒PCR检测试剂盒规格3,3′,5,5′-Tetrabromobisphel A,97%通用试剂　100G

4-Ami-3-nitrophel,98%通用试剂　5G

2-Ami-4-nitrophel,≥99.0%通用试剂　10G

2-Ami-3-nitrophel,98%通用试剂　5G

8-Ami-2-naphthol,97%通用试剂　1G

2-Methylbenzenethiol,95%通用试剂　5G

5-?Chloro-?2-?(2,4-?dichlorophexy)?p...通用试剂　10G

2-(Trifluoromethyl)benzenethiol,96%通用试剂　1G

4-(Trifluoromethylthio)phel,98%通用试剂　5G

2,3,4-Trifluorophel,97%通用试剂　1G

1,2,4-Benzenetriol,99%通用试剂　1G

4-Ami-2,6-dichlorophel,98%通用试剂　5G

(±)-1,1′-Bi(2-naphthol),99%通用试剂　5G

3-Phenylphel,97%通用试剂　1G

2,3,4,6-Tetrachlorophel通用试剂　50MG
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。